Prueba molecular para la leishmaniasis tegumentaria
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Por el equipo editorial de LabMedica en español Actualizado el 26 May 2016 |
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Imagen: La especificidad de la tira inmunocromatográfica de Flujo Lateral-Amplificación de la Recombinasa (RPA-LF) para amplificar las especies del subgénero Viannia. Las especies, L. Viannia más relevantes (L. braziliensis, L. guyanensis y L. panamensis), produjeron bandas más fuertes, en la tira de flujo lateral, que otras especies menos comunes de este subgénero. NTC = Sin control de plantilla (Fotografía cortesía de la Rama Médica de la Universidad de Texas).
La leishmaniasis cutánea y mucosa, están ampliamente distribuidas en América Central y del Sur. La Leishmania del subgénero Viannia son las especies más frecuentes que infectan a los seres humanos. L. (V.) braziliensis, L. (V.) panamensis también son responsables de la leishmaniasis mucosal metastásica.
Las reacciones en cadena de la polimerasa (PCR), en tiempo real o convencional, son pruebas de diagnóstico más sensibles que la microscopía, pero el costo y la necesidad de infraestructura y personal capacitado, hacen que sea poco práctico en la mayoría de las regiones endémicas. Los sistemas de salud primarios requieren una herramienta de diagnóstico, para los puntos de atención (POC), que sea tanto sensible como específica.
Los científicos de la Rama Médica de la Universidad de Texas (UTMB, Galveston, TX, EUA) y sus colegas en América del Sur, evaluaron el ADN purificado a partir de biopsias de lesiones de nueve pacientes del Perú que estaban infectados con L. braziliensis y cuatro con L. guyanensis, así como cinco lesiones no producidas por Leishmania (PCR-negativo) de la piel. También evaluaron muchas cepas diferentes en bancos de diversas especies.
Los investigadores desarrollaron una nueva prueba de diagnóstico molecular, POC, para la leishmaniasis cutánea causada por Leishmania (Viannia) spp. El ADN del parásito fue amplificado utilizando la Amplificación de la Recombinasa Polimerasa isotérmica (RPA) con cebadores y sondas dirigidas contra el ADN del quinetoplasto. El producto de amplificación fue detectado por lectura visual directa con una tira inmunocromatográfica de flujo lateral (LF).
En las muestras clínicas encontraron una concordancia del 100% entre la PCR y la RPA-LF. La RPA-LF tenía una sensibilidad analítica equivalente a 0,1 parásitos por reacción. La prueba amplificó la principal especie L. Viannia de varios países: 33 L. (V.) braziliensis, 17 L. (V.) guyanensis, y nueve L. (V.) panamensis. Las L. (V.) lainsoni, L. (V.) Shawi, y L. (V.) naiffi, menos comunes, también fueron amplificadas. La especificidad fue confirmada por la falta de amplificación de L. donovani, L. chagasi, L. mexicana, L. amazonensis, L. major, Trypanosoma cruzi y de ADN humano.
Los autores concluyeron que la alta sensibilidad analítica y la validación clínica indicaron que la prueba podría mejorar la eficacia de diagnóstico, especialmente en las lesiones crónicas con cargas de parásitos submicroscópicas. La implementación en el campo de la prueba RPA-LF podría contribuir a la gestión y el control de la leishmaniasis cutánea y mucosa. El estudio fue publicado el 16 de abril de 2016 en la revista Public Library of Science Neglected tropical Diseases.
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