ELISA en sándwich con dos antígenos detecta anticuerpos contra el Trypanosoma cruzi

La enfermedad de Chagas (EC), también conocida como tripanosomiasis americana, es una zoonosis tropical transmitida por vectores potencialmente mortal causada por el parásito protozoario Trypanosoma cruzi. La prevalencia estimada de EC en 21 países de América Latina donde se considera endémica supera los cinco millones de individuos; la EC representa aproximadamente 7.500 muertes al año.

Los inmunoensayos indirectos son el método recomendado para el diagnóstico de la enfermedad de Chagas crónica y su desempeño depende de la preparación antigénica empleada. Los antígenos quiméricos se han utilizado con éxito para el diagnóstico in vitro de la EC crónica y abordan de manera eficiente los obstáculos comúnmente encontrados que surgen con el uso de antígenos nativos y recombinantes.

Un equipo de científicos médicos de la Fundación Oswaldo Cruz (Río de Janeiro, Brasil) y sus colegas, desarrollaron y evaluaron cuatro antígenos quiméricos de T. cruzi (IBMP-8.1, IBMP-8.2, IBMP -8.3 e IBMP-8.4) usando un análisis sándwich ELISA de dos antígenos (DAgS-ELISA) como plataforma de diagnóstico. Para superar cualquier limitación, se pueden utilizar antígenos marcados con peroxidasa (HRP), que diagnostican infecciones agudas o crónicas, independientemente de la especie y la clase de inmunoglobulina. El equipo obtuvo un total de 412 sueros de 207 individuos positivos para T. cruzi y 205 negativos para T. cruzi. Además, para evaluar la reactividad cruzada, se adquirieron 68 sueros de individuos con enfermedades no relacionadas, definidas previamente por diagnóstico parasitológico o serológico.

Las diluciones óptimas de suero y conjugado antígeno-enzima (HRP) se determinaron mediante titulación en tablero de ajedrez a diferentes concentraciones de recubrimiento de antígeno quimérico. Los antígenos se diluyeron a las concentraciones finales de 400 ng, 200 ng, 100 ng, 50 ng, 25 ng, 12,5 ng, 6,25 ng, 3,125 ng y 1,56 ng en tampón carbonato-bicarbonato (50 mM, pH 9,6). Estas diluciones (100 μL) se colocaron en microplacas de alta unión de 96 pozos. La absorbancia se midió en un espectrofotómetro de microplaca a una longitud de onda de 450 nm en un instrumento SPECTRAmax 340PC (Molecular Devices, San José, CA, EUA).

Los investigadores informaron que en el estudio de fase I, las áreas bajo la curva de IBMP-8.1, IBMP-8.2, IBMP-8.3 e IBMP-8.4 fueron de 98,7 %, 99,5 %, 98,6 % y 98,8 %, respectivamente. Entre las muestras positivas, el antígeno IBMP-8.1 clasificó 53 (25,6 %) como falsas negativas, IBMP-8.2, 27 (13 %), IBMP-8.3, 24 (11,6 %) e IBMP-8.4, 43 (20,8 %), dando sensibilidades del 74,4 %, 87 %, 88,4 % y 79,2 %, respectivamente. El único antígeno que no alcanzó el 100 % de especificidad fue el IBMP-8.3, con un 96,6 %. IBMP-8.3 también fue la única molécula que mostró reactividad cruzada con el virus linfotrópico de células T humanas (HTLV).

Los autores concluyeron que el IBMP-DAgS-ELISA es adecuado para la detección de anti-T. cruzi en áreas de coendemia con Leishmania spp. Los hallazgos también demuestran la notable capacidad de las cuatro proteínas IBMP para diferenciar entre muestras positivas y negativas para T. cruzi. La especificidad alcanzada con el sistema DAgS-ELISA, alcanzó el 100 % utilizando tres de los cuatro antígenos quiméricos evaluados, IBMP-8.1, IBMP-8.2 e IBMP-8.4. El estudio se publicó el 11 de marzo de 2022 en la revista PLOS Neglected Tropical Disease.

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