Se usan los microbios en las heces para diagnosticar la cirrosis hepática
Por el equipo editorial de LabMedica en español Actualizado el 16 Apr 2019 |
Imagen: El kit de limpieza UltraClean PCR (Fotografía cortesía de MO BIO Laboratories).
La enfermedad del hígado graso no alcohólico (NAFLD, por sus siglas en inglés) es la causa más frecuente de enfermedad hepática crónica en todo el mundo y, sin embargo, sigue siendo poco diagnosticada, incluso en personas con una etapa avanzada de la enfermedad.
La cirrosis por NAFLD representa el estadio más grave de la enfermedad, conlleva un riesgo significativo de carcinoma hepatocelular (CHC) y se identifica sistemáticamente como el factor predictivo más importante de morbilidad-mortalidad relacionada con el hígado en la NAFLD.
Científicos médicos de la Universidad de California en San Diego (La Jolla, CA, EUA) y sus asociados, analizaron la composición microbiana de muestras de heces de 98 personas que se sabía tenían alguna forma de NAFLD y de 105 de sus familiares de primer grado, incluidos algunos gemelos. El estudio incluyó 26 probandos con cirrosis-NAFLD y 37 de sus familiares de primer grado. En el momento de cada consulta, los pacientes proporcionaban muestras de heces. Estas se recolectaron y se almacenaron inmediatamente en un congelador a -80°C.
Se realizó la extracción de ADN y la secuenciación del amplicón 16S rARN y el ADN se extrajo utilizando el kit de ADN Qiagen MagAttract PowerSoil (Qiagen, Hilden, Alemania). La PCR del amplicón se realizó en la región V4 del gen 16S rARN utilizando el par de cebadores 515 f a 806r con códigos de barras de corrección de errores Golay en el cebador inverso. Los amplicones fueron codificados en barras y reunidos en concentraciones iguales para la secuenciación. El grupo de amplicones se purificó con el kit de limpieza MO BIO UltraClean PCR (Carlsbad, CA, EUA) y se secuenció en la plataforma de secuenciación MiSeq (Illumina, San Diego, CA, EUA).
El equipo identificó 27 características bacterianas únicas que eran específicas para los microbiomas intestinales de las heces de personas con cirrosis-NAFLD. Pudieron usar esta prueba no invasiva de heces para seleccionar a las personas con cirrosis-NAFLD conocida con 92% de exactitud, pero lo más importante es que la prueba les permitió diferenciar a los parientes de primer grado con cirrosis-NAFLD previamente no diagnosticada con 87% de exactitud. Los resultados fueron confirmados por imágenes de resonancia magnética (RM).
A nivel de género, tanto el grupo cirrosis-NAFLD como el grupo NAFLD sin fibrosis avanzada se enriquecieron con Streptococcus, pero solo el grupo cirrosis-NAFLD se enriqueció con Megasphaera. Las especies pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae y los géneros Streptococcus y Gallibacterium fueron las más enriquecidas en la cirrosis-NAFLD, mientras que Faecalibacterium prausnitzii y las especies pertenecientes al género Catenibacterium y las familias Rikenellaceae, Mogibacterium, Peptostreptococcaceae, se enriquecieron en los controles no-NAFLD.
Rohit Loomba, MD, profesor de medicina y autor principal del estudio, dijo: “Si podemos tener más capacidad para diagnosticar la cirrosis relacionada con la NAFLD, seremos mejores en el reclutamiento de los tipos correctos de pacientes en los ensayos clínicos, y finalmente estaremos mejor equipados para prevenirla y tratarla. El último avance hacia una prueba de heces no invasiva para la NAFLD-cirrosis también puede ayudar a allanar el camino para otros diagnósticos y terapias basadas en microbiomas, y nos permite ofrecer una medicina personalizada o de precisión para una serie de afecciones”. El estudio fue publicado El 29 de marzo de 2019 en la revista Nature Communications.
Enlace relacionado:
Universidad de California en San Diego
Qiagen
MO BIO
Illumina
La cirrosis por NAFLD representa el estadio más grave de la enfermedad, conlleva un riesgo significativo de carcinoma hepatocelular (CHC) y se identifica sistemáticamente como el factor predictivo más importante de morbilidad-mortalidad relacionada con el hígado en la NAFLD.
Científicos médicos de la Universidad de California en San Diego (La Jolla, CA, EUA) y sus asociados, analizaron la composición microbiana de muestras de heces de 98 personas que se sabía tenían alguna forma de NAFLD y de 105 de sus familiares de primer grado, incluidos algunos gemelos. El estudio incluyó 26 probandos con cirrosis-NAFLD y 37 de sus familiares de primer grado. En el momento de cada consulta, los pacientes proporcionaban muestras de heces. Estas se recolectaron y se almacenaron inmediatamente en un congelador a -80°C.
Se realizó la extracción de ADN y la secuenciación del amplicón 16S rARN y el ADN se extrajo utilizando el kit de ADN Qiagen MagAttract PowerSoil (Qiagen, Hilden, Alemania). La PCR del amplicón se realizó en la región V4 del gen 16S rARN utilizando el par de cebadores 515 f a 806r con códigos de barras de corrección de errores Golay en el cebador inverso. Los amplicones fueron codificados en barras y reunidos en concentraciones iguales para la secuenciación. El grupo de amplicones se purificó con el kit de limpieza MO BIO UltraClean PCR (Carlsbad, CA, EUA) y se secuenció en la plataforma de secuenciación MiSeq (Illumina, San Diego, CA, EUA).
El equipo identificó 27 características bacterianas únicas que eran específicas para los microbiomas intestinales de las heces de personas con cirrosis-NAFLD. Pudieron usar esta prueba no invasiva de heces para seleccionar a las personas con cirrosis-NAFLD conocida con 92% de exactitud, pero lo más importante es que la prueba les permitió diferenciar a los parientes de primer grado con cirrosis-NAFLD previamente no diagnosticada con 87% de exactitud. Los resultados fueron confirmados por imágenes de resonancia magnética (RM).
A nivel de género, tanto el grupo cirrosis-NAFLD como el grupo NAFLD sin fibrosis avanzada se enriquecieron con Streptococcus, pero solo el grupo cirrosis-NAFLD se enriqueció con Megasphaera. Las especies pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae y los géneros Streptococcus y Gallibacterium fueron las más enriquecidas en la cirrosis-NAFLD, mientras que Faecalibacterium prausnitzii y las especies pertenecientes al género Catenibacterium y las familias Rikenellaceae, Mogibacterium, Peptostreptococcaceae, se enriquecieron en los controles no-NAFLD.
Rohit Loomba, MD, profesor de medicina y autor principal del estudio, dijo: “Si podemos tener más capacidad para diagnosticar la cirrosis relacionada con la NAFLD, seremos mejores en el reclutamiento de los tipos correctos de pacientes en los ensayos clínicos, y finalmente estaremos mejor equipados para prevenirla y tratarla. El último avance hacia una prueba de heces no invasiva para la NAFLD-cirrosis también puede ayudar a allanar el camino para otros diagnósticos y terapias basadas en microbiomas, y nos permite ofrecer una medicina personalizada o de precisión para una serie de afecciones”. El estudio fue publicado El 29 de marzo de 2019 en la revista Nature Communications.
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