Optimización de procedimientos analíticos reduce variabilidad de resultados
Por el equipo editorial de LabMedica en español Actualizado el 09 Aug 2018 |
Imagen: La reducción de la variabilidad de los ensayos de arrays de suspensión cuantitativa es fundamental para el éxito de los estudios seroepidemiológicos multicéntricos y grandes (Fotografía cortesía de Pau Fabregat).
Un equipo de investigadores españoles describió recientemente el desarrollo y la optimización de varios ensayos de “arrays de suspensión cuantitativa” (qSAT) diseñados para evaluar las respuestas naturales y las inducidas por las vacunas contra la malaria y otros parásitos.
La reducción de la variabilidad de los ensayos de arrays de suspensión cuantitativa es fundamental para el éxito de los estudios seroepidemiológicos multicéntricos y grandes. Con este fin, los investigadores del Instituto de Salud Global de Barcelona (España) analizaron el efecto de varias condiciones de procedimiento sobre la variabilidad de un ensayo multiplex, interno, de IgG diseñado para detectar diferentes tipos y clases de anticuerpos contra múltiples antígenos de P. falciparum.
El ensayo comprendió diferentes antígenos del parásito acoplados a microesferas. Estas perlas se analizaron para determinar si fueron reconocidas por muestras de plasma de individuos que pudieron haber estado expuestos a la malaria. El ensayo fue diseñado para detectar diferentes tipos y clases de anticuerpos contra múltiples antígenos de P. falciparum, de una manera sensible y específica. Se encontró que el ensayo múltiplex simple era altamente reproducible, no solo entre experimentos sino también cuando era realizado por diferentes operadores y laboratorios.
Los investigadores identificaron los factores clave que requerían optimización para reducir la variabilidad del ensayo. Luego, utilizaron el ensayo para caracterizar mejor el perfil de anticuerpos de la reunión de plasmas humanos contra la malaria proporcionado por la OMS como reactivo de referencia.
Se midieron los niveles de IgG contra siete antígenos de P. falciparum con inmunogenicidades heterogéneas en las muestras de análisis, en un control positivo y en blancos. Se evaluó la variabilidad asociada con cada combinación de condiciones y sus interacciones, y se determinó el número mínimo de muestras y réplicas en blanco requeridas para lograr una buena capacidad de replicación. Los resultados mostraron que la inmunogenicidad del antígeno y la serorreactividad de la muestra definían la dilución óptima para evaluar el efecto de las condiciones del ensayo sobre la variabilidad. Además, el acoplamiento único antígeno-perla, la predilución de las muestras, la incubación a 22 grados Celsius y un procedimiento de lavado automático redujeron la variabilidad.
“Estos protocolos múltiplex simples y reproducibles nos permitirán analizar detalladamente las respuestas naturales y las respuestas de anticuerpos inducidas por vacunas a grandes paneles de antígenos de P. falciparum, y correlacionarlos con la protección contra la malaria”, dijo la autora principal, la Dra. Carlota Dobaño. en el Instituto de Salud Global de Barcelona. “Además, el ensayo es muy versátil y se puede adaptar para estudiar las respuestas a los antígenos de otros microbios o vacunas. Actualmente colaboramos con varios grupos que trabajan en otros campos diferentes de la malaria”.
El estudio fue publicado en la edición en línea del 2 de julio de 2018 de la revista PLOS One.
La reducción de la variabilidad de los ensayos de arrays de suspensión cuantitativa es fundamental para el éxito de los estudios seroepidemiológicos multicéntricos y grandes. Con este fin, los investigadores del Instituto de Salud Global de Barcelona (España) analizaron el efecto de varias condiciones de procedimiento sobre la variabilidad de un ensayo multiplex, interno, de IgG diseñado para detectar diferentes tipos y clases de anticuerpos contra múltiples antígenos de P. falciparum.
El ensayo comprendió diferentes antígenos del parásito acoplados a microesferas. Estas perlas se analizaron para determinar si fueron reconocidas por muestras de plasma de individuos que pudieron haber estado expuestos a la malaria. El ensayo fue diseñado para detectar diferentes tipos y clases de anticuerpos contra múltiples antígenos de P. falciparum, de una manera sensible y específica. Se encontró que el ensayo múltiplex simple era altamente reproducible, no solo entre experimentos sino también cuando era realizado por diferentes operadores y laboratorios.
Los investigadores identificaron los factores clave que requerían optimización para reducir la variabilidad del ensayo. Luego, utilizaron el ensayo para caracterizar mejor el perfil de anticuerpos de la reunión de plasmas humanos contra la malaria proporcionado por la OMS como reactivo de referencia.
Se midieron los niveles de IgG contra siete antígenos de P. falciparum con inmunogenicidades heterogéneas en las muestras de análisis, en un control positivo y en blancos. Se evaluó la variabilidad asociada con cada combinación de condiciones y sus interacciones, y se determinó el número mínimo de muestras y réplicas en blanco requeridas para lograr una buena capacidad de replicación. Los resultados mostraron que la inmunogenicidad del antígeno y la serorreactividad de la muestra definían la dilución óptima para evaluar el efecto de las condiciones del ensayo sobre la variabilidad. Además, el acoplamiento único antígeno-perla, la predilución de las muestras, la incubación a 22 grados Celsius y un procedimiento de lavado automático redujeron la variabilidad.
“Estos protocolos múltiplex simples y reproducibles nos permitirán analizar detalladamente las respuestas naturales y las respuestas de anticuerpos inducidas por vacunas a grandes paneles de antígenos de P. falciparum, y correlacionarlos con la protección contra la malaria”, dijo la autora principal, la Dra. Carlota Dobaño. en el Instituto de Salud Global de Barcelona. “Además, el ensayo es muy versátil y se puede adaptar para estudiar las respuestas a los antígenos de otros microbios o vacunas. Actualmente colaboramos con varios grupos que trabajan en otros campos diferentes de la malaria”.
El estudio fue publicado en la edición en línea del 2 de julio de 2018 de la revista PLOS One.
Últimas Microbiología noticias
- Análisis de sangre predice sepsis e insuficiencia orgánica en niños
- Análisis de sangre para tuberculosis podría detectar millones de propagadores silenciosos
- Un análisis de sangre simple combinado con un modelo de riesgo personalizado mejora el diagnóstico de sepsis
- Nuevo análisis de sangre reduce tiempo de diagnóstico de infecciones por micobacterias no tuberculosas de meses a horas
- Nuevo análisis para tuberculosis podría ampliar acceso a pruebas en países de ingresos bajos y medios
- Prueba rápida diagnostica enfermedades tropicales en horas para tratamiento con antibióticos más rápido
- Pruebas moleculares rápidas permiten tratamiento antibiótico más rápido y específico para neumonía
- Plataforma rápida de PSA proporciona resultados terapéuticos específicos días antes que el estándar de atención actual
- Nuevo método de análisis detecta patógenos en sangre de forma más rápida y precisa al fundir ADN
- Prueba rápida de sepsis ofrece resultados dos días más rápidos
- Diagnóstico rápido portátil por PCR podría detectar gonorrea y susceptibilidad a antibióticos
- Prueba CRISPR diagnostica mpox más rápido que método de PCR de laboratorio
- Prueba de PCR multiplexada para detección de patógenos y resistencia a antibióticos ayuda a brindar un tratamiento rápido de ITU
- Nuevo algoritmo detecta e identifica nuevos organismos bacterianos
- Analizador de mesa promete detección de ITU en 1 hora e indicación de sensibilidad a antibióticos
- Prueba rápida junto a la cama podría proteger a recién nacidos de enfermedades potencialmente mortales