Se detectan los virus Banna mediante amplificación isotérmica mediada por bucle de transcripción reversa
Por el equipo editorial de LabMedica en español Actualizado el 01 Jan 2019 |
Imagen: Detección visual del ensayo RT-LAMP. Los tubos representan cepas de del BAV y los controles negativos utilizados en la inspección visual. 1-7, cepas de BAV; 8-13, otros virus; 14, control negativo (Fotografía cortesía del Instituto de Virología de Wuhan).
Se ha aislado el virus Banna (BAV) de un grupo diverso de vertebrados e invertebrados, incluidos mosquitos, garrapatas, ganado y cerdos de diferentes regiones de China, Vietnam e Indonesia. Se considera que el BAV es un patógeno emergente que puede producir infecciones humanas con posible manifestación de fiebre y encefalitis viral.
La amplificación isotérmica mediada por bucle de transcripción inversa (RT-LAMP) es un método de amplificación de ácidos nucleicos que amplifica el ADN del ARN transcrito de manera inversa utilizando la polimerasa de ADN de desplazamiento de cadena en condiciones isotérmicas. Debido a su rapidez, simplicidad, sensibilidad y especificidad, la RT-LAMP se ha aplicado con éxito para la detección de varios virus de ARN.
Los científicos del Instituto de Virología de Wuhan (Wuhan, China) diseñaron un conjunto de seis cebadores específicos para identificar el segmento 12 del BAV y se desarrolló y comparó el ensayo de amplificación isotérmica mediada por bucle de transcripción inversa (RT-LAMP) con el método convencional de reacción en cadena de la polimerasa de transcripción inversa (RT-PCR). El equipo utilizó varias células y muestras enriquecidas para ensayar el método RT-LAMP.
Al ejecutar el ensayo RT-LAMP, se utilizó un kit de amplificación de ARN DEAOU (RT-LAMP) (DEAOU, Guangzhou, China). La amplificación de RT-PCR en un solo paso para BAV se realizó con el kit Prime-Script RT-PCR de un solo paso Ver.2 (Takara, Dalian, China). El ARN se extrajo de 140 µL de sobrenadante de cultivo de células C6/36 infectadas con BAV, suero humano enriquecidas con BAV o muestras de homogeneizado de mosquitos filtrados utilizando el kit QIAamp Viral RNA Mini (Qiagen, Hilden, Alemania).
El equipo informó que la amplificación del ensayo RT-LAMP se puede obtener en 40 minutos a 65°C. Los resultados de la especificidad mostraron que solo se amplificaron los ARN objetivo de los BAV, incluidos los genotipos A, B y C, y el ensayo demostró una sensibilidad de 3,6 × 10−2 UFP/mL, que fue mayor que la medición por RT-PCR convencional. Se presentó una buena confiabilidad para el ensayo en la evaluación adicional para el ARN de BAV a partir de suero diluido en serie del BAV y 47 muestras de mosquitos de campo.
Los autores concluyeron que habían desarrollado con éxito un ensayo RT-LAMP para la detección del BAV, que proporciona una nueva prueba de diagnóstico molecular potencial para el BAV que podría aplicarse en el campo o la clínica en el futuro y que podría contribuir a la preparación para futuros brotes de una endemia de BAV, especialmente para regiones con recursos disponibles limitados. El estudio fue publicado en línea el 2 de noviembre de 2018 en la revista International Journal of Infectious Diseases.
Enlace relacionado:
Virología de Wuhan
DEAOU
Takara
Qiagen
La amplificación isotérmica mediada por bucle de transcripción inversa (RT-LAMP) es un método de amplificación de ácidos nucleicos que amplifica el ADN del ARN transcrito de manera inversa utilizando la polimerasa de ADN de desplazamiento de cadena en condiciones isotérmicas. Debido a su rapidez, simplicidad, sensibilidad y especificidad, la RT-LAMP se ha aplicado con éxito para la detección de varios virus de ARN.
Los científicos del Instituto de Virología de Wuhan (Wuhan, China) diseñaron un conjunto de seis cebadores específicos para identificar el segmento 12 del BAV y se desarrolló y comparó el ensayo de amplificación isotérmica mediada por bucle de transcripción inversa (RT-LAMP) con el método convencional de reacción en cadena de la polimerasa de transcripción inversa (RT-PCR). El equipo utilizó varias células y muestras enriquecidas para ensayar el método RT-LAMP.
Al ejecutar el ensayo RT-LAMP, se utilizó un kit de amplificación de ARN DEAOU (RT-LAMP) (DEAOU, Guangzhou, China). La amplificación de RT-PCR en un solo paso para BAV se realizó con el kit Prime-Script RT-PCR de un solo paso Ver.2 (Takara, Dalian, China). El ARN se extrajo de 140 µL de sobrenadante de cultivo de células C6/36 infectadas con BAV, suero humano enriquecidas con BAV o muestras de homogeneizado de mosquitos filtrados utilizando el kit QIAamp Viral RNA Mini (Qiagen, Hilden, Alemania).
El equipo informó que la amplificación del ensayo RT-LAMP se puede obtener en 40 minutos a 65°C. Los resultados de la especificidad mostraron que solo se amplificaron los ARN objetivo de los BAV, incluidos los genotipos A, B y C, y el ensayo demostró una sensibilidad de 3,6 × 10−2 UFP/mL, que fue mayor que la medición por RT-PCR convencional. Se presentó una buena confiabilidad para el ensayo en la evaluación adicional para el ARN de BAV a partir de suero diluido en serie del BAV y 47 muestras de mosquitos de campo.
Los autores concluyeron que habían desarrollado con éxito un ensayo RT-LAMP para la detección del BAV, que proporciona una nueva prueba de diagnóstico molecular potencial para el BAV que podría aplicarse en el campo o la clínica en el futuro y que podría contribuir a la preparación para futuros brotes de una endemia de BAV, especialmente para regiones con recursos disponibles limitados. El estudio fue publicado en línea el 2 de noviembre de 2018 en la revista International Journal of Infectious Diseases.
Enlace relacionado:
Virología de Wuhan
DEAOU
Takara
Qiagen
Últimas Microbiología noticias
- Análisis de sangre predice sepsis e insuficiencia orgánica en niños
- Análisis de sangre para tuberculosis podría detectar millones de propagadores silenciosos
- Un análisis de sangre simple combinado con un modelo de riesgo personalizado mejora el diagnóstico de sepsis
- Nuevo análisis de sangre reduce tiempo de diagnóstico de infecciones por micobacterias no tuberculosas de meses a horas
- Nuevo análisis para tuberculosis podría ampliar acceso a pruebas en países de ingresos bajos y medios
- Prueba rápida diagnostica enfermedades tropicales en horas para tratamiento con antibióticos más rápido
- Pruebas moleculares rápidas permiten tratamiento antibiótico más rápido y específico para neumonía
- Plataforma rápida de PSA proporciona resultados terapéuticos específicos días antes que el estándar de atención actual
- Nuevo método de análisis detecta patógenos en sangre de forma más rápida y precisa al fundir ADN
- Prueba rápida de sepsis ofrece resultados dos días más rápidos
- Diagnóstico rápido portátil por PCR podría detectar gonorrea y susceptibilidad a antibióticos
- Prueba CRISPR diagnostica mpox más rápido que método de PCR de laboratorio
- Prueba de PCR multiplexada para detección de patógenos y resistencia a antibióticos ayuda a brindar un tratamiento rápido de ITU
- Nuevo algoritmo detecta e identifica nuevos organismos bacterianos
- Analizador de mesa promete detección de ITU en 1 hora e indicación de sensibilidad a antibióticos
- Prueba rápida junto a la cama podría proteger a recién nacidos de enfermedades potencialmente mortales