Desarrollan métodos ELISA para análisis de inmunoterapia
Por el equipo editorial de LabMedica en español Actualizado el 19 Mar 2018 |
Imagen: El bevacizumab (Avastin) es un medicamento aprobado para la inmunoterapia en los pacientes con carcinoma metastásico de células renales, glioblastoma, cáncer de pulmón no microcítico no escamoso y con cáncer colorrectal metastásico, además del cáncer de cuello uterino (Fotografía cortesía de Genentech).
Se ha desarrollado un nuevo ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) con alta sensibilidad y selectividad para el bioanálisis de bevacizumab (BEV), un anticuerpo monoclonal utilizado para la inmunoterapia de diferentes tipos de cáncer.
El bevacizumab es un anticuerpo monoclonal humanizado recombinante dirigido contra el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), una citoquina que promueve la angiogénesis. El bevacizumab se une al VEGF e inhibe la unión al receptor de VEGF, lo que impide el crecimiento y el mantenimiento de los vasos sanguíneos de los tumores.
Científicos de la Universidad Rey Saud (Riyadh, Arabia Saudita) capturaron el BEV mediante el antígeno humano de la proteína específica del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF); y la inmovilizaron en una placa de ensayo de 96 pozos. Se cuantificaron los complejos BEV-VEGF formados en los pozos de la placa usando inmunoglobulina-G antihumana marcada con peroxidasa de rábano picante (HRP-IgG) y 3,3 ', 5,5`-tetrametilbenzidina (TMB) como sustrato cromogénico para la enzima peroxidasa.
Se establecieron las condiciones óptimas para llevar a cabo el ELISA propuesto y se evaluó su desempeño analítico según las pautas para la validación de inmunoensayos para el bioanálisis de anticuerpos monoclonales terapéuticos. El límite de detección del ensayo fue de 1,01 ng/mL y el intervalo dinámico efectivo de trabajo fue de 3,07 a 100 ng/mL. Se demostraron la exactitud y la precisión del análisis. El presente ensayo con un análisis de alto rendimiento fue muy fácil de realizar en una placa de 96 pozos y permite a un operador analizar un lote de aproximadamente 200 muestras, por triplicado. Esto facilita el procesamiento de una gran cantidad de muestras en los entornos clínicos. El uso del análisis ELISA eliminó la necesidad de realizar el pretratamiento de las muestras de plasma mediante cromatografía de afinidad o a través de otro sistema sofisticado.
Los autores también han desarrollado un ensayo similar para el cetuximab (CET) en muestras de plasma humano. El CET fue capturado por el antígeno específico de la proteína del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) e inmovilizada en una placa de análisis de 96 pozos. El complejo CET-EGFR formado en los pozos de la placa se cuantificó usando la enzima fosfatasa alcalina marcada con IgG antihumana (ALP-IgG) y sustrato de fosfato de para-nitrofenilo (pNPP) como sustrato cromogénico, para la enzima fosfatasa alcalina. El límite de detección del ensayo fue de 1,5 ng / mL y el intervalo dinámico efectivo de trabajo fue de 0,005-6,25 μg / mL. Los estudios se publicaron el 31 de enero de 2018 en la revista Current Pharmaceutical Analysis.
El bevacizumab es un anticuerpo monoclonal humanizado recombinante dirigido contra el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), una citoquina que promueve la angiogénesis. El bevacizumab se une al VEGF e inhibe la unión al receptor de VEGF, lo que impide el crecimiento y el mantenimiento de los vasos sanguíneos de los tumores.
Científicos de la Universidad Rey Saud (Riyadh, Arabia Saudita) capturaron el BEV mediante el antígeno humano de la proteína específica del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF); y la inmovilizaron en una placa de ensayo de 96 pozos. Se cuantificaron los complejos BEV-VEGF formados en los pozos de la placa usando inmunoglobulina-G antihumana marcada con peroxidasa de rábano picante (HRP-IgG) y 3,3 ', 5,5`-tetrametilbenzidina (TMB) como sustrato cromogénico para la enzima peroxidasa.
Se establecieron las condiciones óptimas para llevar a cabo el ELISA propuesto y se evaluó su desempeño analítico según las pautas para la validación de inmunoensayos para el bioanálisis de anticuerpos monoclonales terapéuticos. El límite de detección del ensayo fue de 1,01 ng/mL y el intervalo dinámico efectivo de trabajo fue de 3,07 a 100 ng/mL. Se demostraron la exactitud y la precisión del análisis. El presente ensayo con un análisis de alto rendimiento fue muy fácil de realizar en una placa de 96 pozos y permite a un operador analizar un lote de aproximadamente 200 muestras, por triplicado. Esto facilita el procesamiento de una gran cantidad de muestras en los entornos clínicos. El uso del análisis ELISA eliminó la necesidad de realizar el pretratamiento de las muestras de plasma mediante cromatografía de afinidad o a través de otro sistema sofisticado.
Los autores también han desarrollado un ensayo similar para el cetuximab (CET) en muestras de plasma humano. El CET fue capturado por el antígeno específico de la proteína del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) e inmovilizada en una placa de análisis de 96 pozos. El complejo CET-EGFR formado en los pozos de la placa se cuantificó usando la enzima fosfatasa alcalina marcada con IgG antihumana (ALP-IgG) y sustrato de fosfato de para-nitrofenilo (pNPP) como sustrato cromogénico, para la enzima fosfatasa alcalina. El límite de detección del ensayo fue de 1,5 ng / mL y el intervalo dinámico efectivo de trabajo fue de 0,005-6,25 μg / mL. Los estudios se publicaron el 31 de enero de 2018 en la revista Current Pharmaceutical Analysis.
Últimas Inmunología noticias
- Método de prueba podría ayudar a más pacientes recibir tratamiento adecuado contra el cáncer
- Prueba innovadora monitorea toxicidad de radioterapia en pacientes con cáncer
- Técnicas de vanguardia para investigar respuesta inmune en infecciones mortales por estreptococo A
- Novedosos inmunoensayos permiten diagnóstico temprano del síndrome antifosfolípido
- Nueva prueba podría predecir éxito de inmunoterapia para una gama más amplia de cánceres
- Pruebas simples de proteínas en sangre predicen resultados de CAR T para pacientes con linfoma
- Tecnología de chip clasificador de células podría allanar el camino para elaboración de perfiles inmunológicos POC
- Chip monitorea células cancerosas en muestras de sangre para evaluar eficacia del tratamiento
- Enfoques de inmunohematología automatizados pueden resolver incompatibilidad de trasplantes
- IA aprovecha genética tumoral para predecir respuesta del paciente a quimioterapia
- Primer dispositivo de monitoreo de leucocitos portátil y no invasivo del mundo elimina necesidad de extracción de sangre
- Prueba predictiva de células T detecta respuesta inmune a virus incluso antes de que se formen anticuerpos
- Analizador de inmunoensayo fluorescente portátil para pruebas POC rápidas transforma diagnósticos clínicos
- Detección multiparamétrica de autoanticuerpos ayuda a diagnosticar miositis
- Analizador CLIA todo en uno transforma el panorama del diagnóstico clínico
- Primera prueba de biomarcadores en sangre para predecir respuesta al tratamiento en pacientes con cáncer