Método no invasivo captura células tumorales circulantes
Por el equipo editorial de LabMedica en español Actualizado el 28 Aug 2014 |
Imagen: El clasificador celular activado por fluorescencia, FACScan (Fotografía cortesía de BD).
Se ha presentado un sistema fluorescente, demostrado clínicamente, de captura de células tumorales circulantes (CTC), para el cáncer colorrectal, guiado por virus, para la realización de pruebas genéticas.
Estos diagnósticos acompañantes, no invasivos, son importantes para la terapia personalizada, dirigida contra el cáncer, porque las estrategias actuales de detección de las CTC dependen principalmente de los marcadores en la superficie de las células epiteliales, y la presencia de poblaciones heterogéneas de CTC con características epiteliales y/o mesenquimales pueden plantear obstáculos para la detección de las CTC.
Científicos de la Universidad de Okayama (Japón) desarrollaron un nuevo método para capturar las CTCs en vivo entre millones de leucocitos de la sangre periférica, utilizando una proteína verde fluorescente (GFP) que expresa el adenovirus atenuado, en el que el promotor de la telomerasa regula la replicación viral. El equipo utilizó diferentes líneas celulares y un adenovirus recombinante.
Se realizó la coloración inmunoquímica en células sembradas en portaobjetos de cámara de cultivo de tejidos. Las células fueron marcadas con anticuerpos primarios de ratón para varios receptores y se analizaron mediante citometría de flujo de células individuales (FACS; Becton Dickinson, Mountain View, CA, EUA). Se extrajo el ADN a partir de modelos de CTC y muestras clínicas y el análisis de la mutación de los genes se realizó por secuenciación directa y la secuencia de cada uno de los genes fue analizada con un Analizador Genético ABI PRISM 3100 (Life Technologies; Carlsbad, CA, EUA).
Las muestras de sangre obtenidas de ocho pacientes con cánceres colorrectales que contenían genes mutados fueron analizadas por el sistema de captura de células tumorales circulantes, basado en el adenovirus OBP-401, de replicación competente y por la reacción en cadena de la polimerasa con bloqueo específico de los alelos (ASB-PCR). En experimentos preliminares, el número de células positivas para la GFP en la puerta P3 fue de menos de 10 células en algunas muestras de sangre clínicas y, por lo tanto, se realizó un análisis de ASB-PCR usando células GFP-positivas en la puerta P2. Entre las ocho muestras de sangre de pacientes con diversas etapas del cáncer colorrectal, se detectaron las mismas mutaciones de genes en las CTC como en los tumores primarios de dos pacientes con cáncer colorrectal avanzado.
Los autores llegaron a la conclusión de que han establecido un sistema de captura de células tumorales circulantes dependiente de la telomerasa para la genotipificación de tipos de CTCs epiteliales, mesenquimales y de transición epiteliales-mesenquimales (EMT), usando la variante competente OBP-401 del adenovirus-replicación específica-telomerasa y análisis de clasificación de las células activado por fluorescencia (FACS). Esta tecnología facilita la vigilancia de las alteraciones genéticas en las CTC viables en los pacientes con cáncer. El estudio fue publicado el 8 de julio de 2014, en la revista Gut.
Enlaces relacionados:
Okayama University
Becton Dickinson
Life Technologies
Estos diagnósticos acompañantes, no invasivos, son importantes para la terapia personalizada, dirigida contra el cáncer, porque las estrategias actuales de detección de las CTC dependen principalmente de los marcadores en la superficie de las células epiteliales, y la presencia de poblaciones heterogéneas de CTC con características epiteliales y/o mesenquimales pueden plantear obstáculos para la detección de las CTC.
Científicos de la Universidad de Okayama (Japón) desarrollaron un nuevo método para capturar las CTCs en vivo entre millones de leucocitos de la sangre periférica, utilizando una proteína verde fluorescente (GFP) que expresa el adenovirus atenuado, en el que el promotor de la telomerasa regula la replicación viral. El equipo utilizó diferentes líneas celulares y un adenovirus recombinante.
Se realizó la coloración inmunoquímica en células sembradas en portaobjetos de cámara de cultivo de tejidos. Las células fueron marcadas con anticuerpos primarios de ratón para varios receptores y se analizaron mediante citometría de flujo de células individuales (FACS; Becton Dickinson, Mountain View, CA, EUA). Se extrajo el ADN a partir de modelos de CTC y muestras clínicas y el análisis de la mutación de los genes se realizó por secuenciación directa y la secuencia de cada uno de los genes fue analizada con un Analizador Genético ABI PRISM 3100 (Life Technologies; Carlsbad, CA, EUA).
Las muestras de sangre obtenidas de ocho pacientes con cánceres colorrectales que contenían genes mutados fueron analizadas por el sistema de captura de células tumorales circulantes, basado en el adenovirus OBP-401, de replicación competente y por la reacción en cadena de la polimerasa con bloqueo específico de los alelos (ASB-PCR). En experimentos preliminares, el número de células positivas para la GFP en la puerta P3 fue de menos de 10 células en algunas muestras de sangre clínicas y, por lo tanto, se realizó un análisis de ASB-PCR usando células GFP-positivas en la puerta P2. Entre las ocho muestras de sangre de pacientes con diversas etapas del cáncer colorrectal, se detectaron las mismas mutaciones de genes en las CTC como en los tumores primarios de dos pacientes con cáncer colorrectal avanzado.
Los autores llegaron a la conclusión de que han establecido un sistema de captura de células tumorales circulantes dependiente de la telomerasa para la genotipificación de tipos de CTCs epiteliales, mesenquimales y de transición epiteliales-mesenquimales (EMT), usando la variante competente OBP-401 del adenovirus-replicación específica-telomerasa y análisis de clasificación de las células activado por fluorescencia (FACS). Esta tecnología facilita la vigilancia de las alteraciones genéticas en las CTC viables en los pacientes con cáncer. El estudio fue publicado el 8 de julio de 2014, en la revista Gut.
Enlaces relacionados:
Okayama University
Becton Dickinson
Life Technologies
Últimas Tecnología noticias
- Nuevo sistema de diagnóstico de laboratorio en un chip iguala la precisión de las pruebas de PCR
- Biosensor de ADN permite diagnóstico temprano del cáncer de cuello uterino
- Dispositivos de microfluidos autocalentables pueden detectar enfermedades en pequeñas muestras de sangre o fluidos
- Avance en tecnología de diagnóstico podría hacer que pruebas en el sitio sean ampliamente accesibles
- Primera tecnología de su tipo para detectar glucosa en saliva humana
- Dispositivo electroquímico identifica personas con mayor riesgo de osteoporosis mediante una sola gota de sangre
- Nueva prueba no invasiva detecta infección por malaria sin muestra de sangre
- Dispositivos de detección optofluídicos portátiles podrían realizar simultáneamente una variedad de pruebas médicas
- Solución de software para punto de atención ayuda a manejar escenarios de pruebas POC dispares en ubicaciones de prueba de pacientes
- Biosensor electrónico detecta biomarcadores en muestras de sangre completa sin agregar reactivos
- Prueba innovadora detecta marcadores biológicos relacionados con una variedad mayor de cánceres
- Kit de detección rápida POC determina la salud intestinal a partir de muestras de suero sanguíneo y heces
- Dispositivo convierte teléfono inteligente en microscopio de fluorescencia por solo 50 dólares
- Lector de tubos portátil habilitado para Wi-Fi diseñado para una fácil portabilidad
- Novedosa plataforma de pruebas de diagnóstico asegura el tiempo de respuesta a situaciones de pandemia emergentes
- Transistor revolucionario podría permitir dispositivos portátiles para medir el sodio y el potasio en la sangre