Aplicación clínica de recuentos de leucocitos basados en análisis de metilación de ADN dirigido
Por el equipo editorial de LabMedica en español Actualizado el 18 Mar 2022 |
Los subconjuntos de leucocitos generalmente se cuantifican con dispositivos automatizados de recuento de células y, en particular, para la estratificación de subconjuntos de linfocitos con citometría de flujo. A pesar de su amplia aplicación, los métodos convencionales tienen varias limitaciones.
La metilación del ADN (ADNm) es una modificación covalente de los residuos de citosina, principalmente en los dinucleótidos CG (sitios CpG). Al medir el nivel de metilación en los sitios CpG con hipometilación o hipermetilación específica del tipo de célula, es posible cuantificar la composición de los subconjuntos de leucocitos mediante algoritmos estadísticos (modelos de desconvolución).
Los ingenieros biomédicos de la Universidad RWTH Aachen (Aachen, Alemania) y sus colegas optimizaron y validaron los ensayos de ADNm dirigidos para la desconvolución de leucocitos utilizando 332 muestras de sangre venosa y 122 capilares de donantes sanos. Además, analizaron 36 muestras de pruebas de anillo y sangre venosa de 266 pacientes diagnosticados con diferentes enfermedades hematológicas. La deconvolución de los tipos de células se determinó con varios modelos utilizando valores de ADNm obtenidos mediante pirosecuenciación o PCR de gotitas digitales (ddPCR).
El ADN se aisló de 150 µL de sangre venosa o 50 µL de sangre capilar y se trató con bisulfito con el kit de metilación de ADN EZ (Zymo Research, Irvine, CA, EUA). Los amplicones de PCR se secuenciaron en un PyroMark Q96 ID (Qiagen, Hilden, Alemania) y se analizaron con PyroMark Q96 CpG 1.0.9 de Qiagen. La reacción en cadena de la polimerasa de gotitas digitales (ddPCR) se llevó a cabo con el lector digital de gotitas QX200 (Bio-Rad, Hercules, CA, EUA). También se realizó la cuantificación absoluta de leucocitos por pirosecuenciación.
Los investigadores informaron que la cuantificación relativa de leucocitos se correlacionó con los hemogramas convencionales para granulocitos, linfocitos, células B, células T (CD4 o CD8), células asesinas naturales y monocitos con mediciones de pirosecuenciación y ddPCR. En algunos pacientes, particularmente con neoplasias malignas hematopoyéticas, observaron valores atípicos en los recuentos de leucocitos epigenéticos, que podían discernirse si las proporciones relativas de los subconjuntos de leucocitos no sumaban el 100 %. Además, la cuantificación absoluta se obtuvo añadiendo muestras de sangre con un plásmido de referencia de número de copias conocido. Los resultados confirmaron la hipometilación específica del tipo de célula en los genes WDR20, CD4, CD8A, WIPI2, SLC15A4 y CENPA, que fue más pronunciada en comparación con los datos de Illumina BeadChip o la estimación inversa de mínimos cuadrados no negativos (NNLS).
Los autores concluyeron que el análisis de ADNm dirigido mediante pirosecuenciación o ddPCR es una alternativa válida para cuantificar subconjuntos de leucocitos, pero algunos ensayos requieren una mayor optimización. El estudio fue publicado el 14 de febrero de 2022 en la revista Clinical Chemistry.
Enlaces relacionados:
RWTH Aachen University
Zymo Research
Qiagen
Bio-Rad
Últimas Hematología noticias
- Instrumento de próxima generación detecta trastornos de la hemoglobina en recién nacidos
- Primera prueba NAT 4 en 1 para el cribado de arbovirus podría reducir el riesgo de infecciones transmitidas por transfusiones
- Prueba de sangre POC por punción digital determina riesgo de sepsis neutropénica en pacientes sometidos a quimioterapia
- Primera prueba rápida y asequible para beta talasemia demuestra precisión diagnóstica del 99 %
- Rastreador portátil de glóbulos blancos podría permitir pruebas rápidas de infecciones
- Analizador hematológico optofluídico inteligente del tamaño de la palma de la mano permite realizar pruebas POC de células sanguíneas del paciente
- Plataforma de hematología automatizada ofrece desempeño analítico de alto rendimiento
- Nueva herramienta analiza plaquetas sanguíneas de forma más rápida, sencilla y precisa
- Primer analizador de hematología de resultados rápidos informa medidas de infección y gravedad en el POC
- Prueba de diagnóstico de riesgo de hemorragia reduce complicaciones prevenibles en hospitales
- Verdadero analizador de hematología POC con muestreo capilar directo mejora facilidad de uso y rendimiento de pruebas
- Analizador de hemograma completo para el punto de atención con muestreo capilar directo mejora facilidad de uso y rendimiento de pruebas
- Examen de sangre podría predecir resultados en el departamento de emergencias y admisiones hospitalarias
- Nueva tecnología diagnostica inmunotrombosis mediante análisis de gases de aliento
- Sistema de hematología avanzado permite a laboratorios procesar hasta 119 resultados de hemogramas por hora
- Método único basado en IA automatiza análisis clínico de datos sanguíneos