Kit de amplificación isotérmica mediada por bucle detecta la enfermedad de Chagas

La enfermedad de Chagas (EC), también conocida como tripanosomiasis americana, es una enfermedad tropical desatendida, causada por el parásito protozoario Trypanosoma cruzi que afecta entre seis y siete millones de personas en todo el mundo, principalmente en áreas endémicas de 21 países latinoamericanos.

La enfermedad evoluciona desde una fase aguda cuando se adquiere la infección, que frecuentemente es asintomática, a una fase crónica que puede desarrollar, hasta en un 30% de los casos, enfermedad cardíaca, y en un 10% de los casos mega-síndromes digestivos, neurológicos y/o complicaciones mixtas.

Los biólogos moleculares del Instituto de Investigación en Ingeniería Genética y Biología Molecular (Buenos Aires, Argentina) y sus colegas, desarrollaron un método de amplificación isotérmica mediada por bucle como un diagnóstico listo para usar que requiere un mínimo de instalaciones de laboratorio para diagnosticar la EC. Evaluaron su exactitud diagnóstica para la detección de la enfermedad de Chagas aguda (EC) en diferentes escenarios epidemiológicos y clínicos.

En un estudio retrospectivo, una serie de muestras clínicas de conveniencia (sangre venosa tratada con EDTA o diferentes agentes estabilizadores, sangre de punción en el talón en papel de filtro o muestras de líquido cefalorraquídeo (LCR)) de 30 bebés nacidos de madres seropositivas (13 con EC congénita y 17 no infectados), cuatro receptores de órganos de donantes con EC, seis casos de infección oral después del consumo de jugo de guayaba contaminado y seis pacientes con EC coinfectados por el VIH, en riesgo de reactivación de la EC (N = 46 pacientes, 46 muestras de sangre y una muestra de LCR). Todas las muestras fueron procesadas con el kit de T. cruzi Loopamp (Tc LAMP) y PCR cuantitativa en tiempo real estandarizada (qPCR). Se llevó a cabo una qPCR dúplex en tiempo real usando sondas TaqMan dirigidas al ADN satélite de T. cruzi, más un control de amplificación interno (IAC), en un termociclador ABI7500 (Applied Biosystems, Foster City, CA, EUA).

El equipo informó que la sensibilidad y especificidad del kit Tc LAMP en muestras de sangre de los grupos clínicos combinados fue del 93% (IC del 95%: 77–99) y del 100% (IC del 95%: 80–100) respectivamente. La concordancia entre la prueba Tc LAMP y la qPCR fue casi perfecta (κ = 0,92, IC del 95%: 0,62-1,00). El kit de T. cruzi Loopamp fue sensible y específico para la detección de la infección por T. cruzi. Se realizó a partir de ADN extraído de muestras de sangre periférica (vía sangre EDTA congelada, sangre con EDTA y clorhidrato de guanidina, sangre DNAgard y manchas de sangre seca), así como en muestras de LCR infectadas con poblaciones de parásitos TcI o TcII/V/VI.

Los autores concluyeron que la prueba Tc LAMP es una herramienta de laboratorio rápida, potencialmente útil, para el diagnóstico y seguimiento del tratamiento de las infecciones agudas por T. cruzi y los casos de reactivación. Sus ventajas son que no se necesita una infraestructura de laboratorio compleja, lo que permite su aplicación en instalaciones sanitarias con equipos limitados y da resultados rápidamente mediante la detección a simple vista. El estudio fue publicado el 14 de agosto de 2020 en la revista PLOS Neglected Tropical Diseases.

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Instituto de Investigación en Ingeniería Genética y Biología Molecular
Applied Biosystems