Cromatografía en capa fina fluorescente puede diagnosticar la úlcera de Buruli

La infección por Mycobacterium ulcerans, conocida como la úlcera de Buruli, es una enfermedad de la piel y los tejidos subcutáneos, que es una enfermedad tropical importante, pero desatendida, con un impacto importante en las zonas rurales de África occidental y central, donde las instalaciones para el diagnóstico y la gestión están poco desarrolladas.

Dado que la prevención no es posible en ausencia de una vacuna eficaz o de una comprensión clara de la forma de transmisión, una estrategia de control importante para la úlcera de Buruli es la detección temprana y el tratamiento, una estrategia que depende de la confirmación eficaz por parte del laboratorio de los casos sospechosos. Las técnicas de laboratorio de rutina, estándar, para la confirmación de la úlcera de Buruli son el aislamiento de M. ulcerans por cultivo, la histopatología, un estudio microscópico del frotis en busca de bacilos ácido-alcohol resistentes (BAAR) y la reacción en cadena de la polimerasa (PCR).


Un equipo internacional de científicos encabezados por los de Universidad Kwame Nkrumah de Ciencia y Tecnología (KNUST) (Kumasi, Ghana) reclutó pacientes de los centros de tratamiento para la úlcera de Buruli, desde enero de 2014 hasta junio de 2014 en Benin, República Democrática del Congo , Ghana y Costa de Marfil, si tenían una lesión cutánea sospechosa de ser causada por una infección por M. ulcerans. Las muestras se recogieron por aspiración con aguja fina (BACAF) o con un hisopo, de acuerdo a si la lesión era ulcerada o no ulcerada, respectivamente, y por biopsia si la muestra era obtenida durante la cirugía. Si la PCR para la secuencia de repetición IS2404 de M. ulcerans era positiva, los pacientes fueron incluidos como pacientes con enfermedad de úlcera de Buruli y si la PCR daba resultados negativos, fueron incluidos en el grupo de control.

El equipo evaluó un método por cromatografía en capa fina fluorescente (f-TLC) para la detección de micolactona en el laboratorio a partir de muestras de pacientes con úlcera de Buruli y pacientes con lesiones similares que dieron un resultado negativo en la PCR. La f-TLC utilizada fue una modificación de una metodología existente. Las placas de TLC fueron colocadas en una lámpara ultravioleta con un filtro de 365 nm. La banda fluorescente en el factor de retención de 0,23 de la muestra del paciente fue comparada con la de los estándares para confirmar la presencia de la micolactona. Se hicieron dos lecturas para confirmar el resultado de la prueba de micolactona antes del reporte del resultado de la prueba y los lectores no conocían el resultado de la prueba de PCR.

Hubo 71 muestras positivas de PCR para IS2404 y 28 muestras negativas de PCR, que se utilizaron como controles. Los científicos descubrieron que la micolactona se pudo detectar en el 73% de las muestras infectadas por M. ulcerans por cromatografía en capa fina fluorescente. La técnica es fácil de realizar y el resultado se puede leer en una hora. La sensibilidad fue mayor que la de la microscopía (30-60%) o del cultivo (35% -60%) y se compara favorablemente con el de la histología (82%). No hubo diferencia en la sensibilidad cuando la BACAF y los hisopos fueron comparados aunque el número de muestras de BACAF fue pequeño.

Los autores concluyeron que la micolactona que se puede detectar en muestras de tejido de piel infectado por M. ulcerans mediante la técnica de f-TLC. La técnica es simple, fácil de realizar y leer, con costos mínimos. En este estudio fue realizado por un miembro del grupo de cada país endémico. Es una herramienta potencialmente realizable a nivel de distrito después de la evaluación de estudios de campo más grandes. El estudio fue publicado el 19 de noviembre de 2015, en la revista Public Library of Science Neglected Tropical Diseases.

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Kwame Nkrumah University of Science and Technology