Método rápido detecta enfermedad de Creutzfeldt-Jakob en líquido cefalorraquídeo

Un problema en el tratamiento de diversas enfermedades neurodegenerativas de proteínas mal plegadas es el diagnóstico temprano y exacto, y esto es especialmente importante en las enfermedades priónicas humanas.

Los ensayos de conversión inducida por temblores en tiempo real (RT-QuIC), del líquido cefalorraquídeo (LCR), y de las muestras de cepillado nasal son valiosas para diferenciar la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob (ECJ) de condiciones no ECJ pero requieren más de dos días y un máximo de cinco días para completarse.


Los científicos de los Institutos Nacionales de la Salud (NIH; Hamilton, Montana, EUA) y sus colegas obtuvieron muestras de líquido cefalorraquídeo de pacientes con diagnóstico de posible o probable enfermedad de Creutzfeldt-Jakob en el momento del muestreo, así como de pacientes con otros trastornos neurológicos, incluyendo la enfermedad de Alzheimer, la esclerosis lateral amiotrófica, la enfermedad atípica de Parkinson, la demencia, la distonía, y otras siete trastornos neurológicos.

Los análisis de RT-QuIC fueron realizados en muestras de LCR. Las mezclas de reacción fueron cargadas en una placa de 96 pozos de color negro y fondo transparente y a las mezclas de reacción les añadieron LCR para un volumen final de reacción de 100 µL. Las placas fueron selladas e incubadas en un lector de placas BMG FLUOstar Omega (BMG LABTECH; Ortenberg, Alemania; www.bmglabtech.com) a temperaturas de 42°C o 55°C durante 55 a 90 horas, con ciclos de 60 segundos de agitación y 60 segundos de descanso a lo largo de la incubación. Las mediciones de fluorescencia de la tioflavina T, fueron realizadas a una longitud de onda de excitación de 450 ± 10 nm y de emisión: 480 ± 10 nm, cada 45 minutos.

El ensayo mejorado de RT-QuIC identificó muestras de LCR positivas en un tiempo de cuatro a 14 horas con una mejor sensibilidad analítica. Por otra parte, el análisis de 11 pacientes con ECJ demostró que mientras que siete eran RT-QuIC positivas utilizando las condiciones anteriores, 10 fueron positivas mediante el nuevo ensayo. En estos y otros análisis, un total de 46 de 48 muestras de LCR de pacientes con ECJ esporádica eran positivas, mientras que todos los 39 pacientes sin ECJ dieron resultados negativos, dando 95,8% de sensibilidad diagnóstica y una especificidad del 100%.

Los autores concluyeron que habían mejorado notablemente el análisis RT-QuIC del LCR humano de tal manera que los pacientes con ECJ y sin ECJ se pueden discriminar en cuestión de horas en lugar de días con una mejor sensibilidad. Estas mejoras deben permitir el análisis mucho más rápido, más exacto y más práctico para la ECJ. En términos más generales, el estudio proporciona un prototipo para pruebas para el análisis de agregados de proteínas mal plegadas que causan muchas enfermedades amiloides importantes, como la enfermedad de Alzheimer, el Parkinson, y las tauopatías. El estudio fue publicado originalmente el 20 de enero de 2015, en la revista mBio.

Enlaces relacionados:

US National Institutes of Health

BMG LABTECH