Inmunoanálisis detecta cinco virus de encefalitis

Se ha desarrollado un ELISA-array que detectará cinco virus diferentes de encefalitis.

El análisis ELISA-array se basa en un formato ELISA en sándwich y consiste de anticuerpos virales impresos directamente en placas de microtitulación de 96 pozos, permitiendo la detección directa de cinco arbovirus.

Los virólogos del Instituto de Microbiología y Epidemiología (Beijing, China) prepararon anticuerpos monoclonales contra cinco virus: el virus de la encefalitis japonesa (JEV), el virus de la encefalitis transmitido por garrapatas (TBEV), el virus de la encefalitis equina oriental (EEEV), el virus Sindbis (SV) y el virus del dengue (VD). Los anticuerpos fueron colocados utilizando una máquina BD6000 en las placas de ELISA a 30 nL/punto. Se prepararon siete anticuerpos monoclonales contra cinco virus asociados a la encefalitis que fueron utilizados para el desarrollo de la prueba ELISA-array. Anticuerpos idénticos usados en el formato ELISA-array también fueron ensayados en un formato convencional de ELISA para determinar la diferencia en sensibilidad y especificidad de los dos métodos.

Se comparó y demostró el límite de detección de los dos métodos. La prueba de reactividad cruzada fue realizada utilizando células BHK-21 y lisado de células Vero, cultivos del virus de la fiebre amarilla (VFA), cultivos del virus del Nilo Occidental (VNO), y virus de la encefalitis equina occidental. Los resultados demostraron que ni el ELISA-array ni el ELISA tradicional mostraron una reactividad cruzada. Se prepararon mezclas usando volúmenes iguales de TBEV, JEV, 2-DV, DV-4, SV y EEEV para la detección de una sola muestra; dos o tres de los cultivos fueron mezclados para la detección múltiplex. La máquina de puntos BD6000 es fabricada por BioDot (Irvine, California, EUA).

Los autores concluyeron que el ELISA-array, desarrollado, demostró tener una especificidad similar y una mayor sensibilidad en comparación con los ELISA convencionales. Este método fue validado por los diferentes cultivos virales y tres huevos de pollo inoculados con suero infectado de pacientes. Los resultados demostraron que el ELISA-array, desarrollado, es sensible y fácil de usar, por lo que tiene potencial para el uso clínico. El tiempo de cuatro horas requerido para el ELISA-array es significativamente menor que para los ELISAs convencionales. Con las características de facilidad de uso, sensibilidad, especificidad y precisión, la prueba ELISA-array sería ampliamente aceptada para uso clínico. El estudio ha estado disponible en línea desde el 27 de febrero 2012, en la revista Virology Journal.


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