Nuevo método simplifica descubrimiento y análisis de biomarcadores en sangre

Por el equipo editorial de LabMedica en español
Actualizado el 20 Sep 2016

Se ha desarrollado un nuevo método de análisis de a expresión genética para ampliar el uso de la sangre en el descubrimiento y el análisis de biomarcadores dado que la mayoría de las células son eritrocitos que transportan oxígeno, causando una enriquecimiento de moléculas de globina de ácido ribonucleico (ARN) desde 50% hasta 80%, entre todo el ARN de la sangre.

Imagen: El fluorómetro analítico Qubit 2.0 para el ADN, el ARN y la cuantificación de proteínas (Fotografía cortesía de Thermo Fisher Scientific).

Como un tipo de biopsia líquida, la sangre es ampliamente utilizada en estudios clínicos debido a su facilidad de toma de muestras, su transporte de biomoléculas de todo el cuerpo y su dinámica rápida, pero la alta prevalencia de globina complica los estudios de los biomarcadores en sangre, relacionados con la expresión génica, causando un sesgo técnico y dejando moléculas biológicamente relevantes sin detectar.

Los científicos del Instituto Karolinska (Huddinge, Suecia) y sus colegas desarrollaron el nuevo método que consiste en un par de hebras cortas de ADN sintético que silencian la mayoría de las moléculas de globina de ARN mediante uniones altamente específicas. Las hebras son introducidas a la muestra de ARN purificado, y de acuerdo con el equipo, se vuelven eficaces inmediatamente después de la desnaturalización del ARN y añaden sólo diez minutos de tiempo de incubación para todo el procedimiento de la síntesis de ADN complementario.

Las moléculas de ADN de bloqueo se unen específicamente al sitio poli-A de la globina del ARN que se necesita para su posterior análisis. Por lo tanto, los ARN de globina están “bloqueados” antes de las manipulaciones aguas abajo y no están disponibles para causar sesgos técnicos en aplicaciones de biomarcadores de ARN en la sangre. Las concentraciones de ARN y el número de integridad del ARN (RIN) fueron medidos con un kit de ARN Total Nano en un Bioanalizador Agilent 2100 (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, EUA) o en un fluorómetro Qubit (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, EUA).

Kaarel Krjutškov, PhD, autor principal del estudio, dijo: “La tasa de reducción de globina GlobinLock (GL) es suficiente para prácticamente todas las aplicaciones. Reduce la prevalencia de la globina desde 63% antes, a 5%, lo que hace que sea una herramienta eficaz para las empresas de biotecnología como un aditivo para sus kits. “Los autores concluyeron que habían desarrollado un método simple y rentable para superar la limitación causada por la globina del mARN en estudios de biomarcadores cuando se utilizan muestras de ARN de sangre total. Los datos presentados obtenidos mediante qPCR y pruebas y ARN-seq demuestran el efecto positivo de reducción de GL con muestras de ARN de sangre total de humanos adultos e indica su potencial para la especie. El estudio fue publicado el 12 de agosto de 2016, en la revista Scientific Reports.

Enlaces relacionados:

Karolinska Institute

Agilent Technologies

Thermo Fisher Scientific