Prueba de saliva basada en CRISPR detecta tuberculosis en esputo

La tuberculosis sigue siendo una de las principales causas de muerte infecciosa a nivel mundial, y diagnosticarla con rapidez y precisión sigue siendo un gran desafío. Los métodos actuales, como el cultivo, la baciloscopia de esputo y la PCR, presentan desventajas en cuanto a velocidad, sensibilidad y accesibilidad, y a menudo requieren equipos costosos y experiencia especializada. En las regiones de bajos recursos, existe una necesidad apremiante de una herramienta sencilla y asequible para detectar la tuberculosis de forma fiable en el punto de atención. Investigadores han desarrollado una prueba diagnóstica rápida en saliva basada en esputo para satisfacer esta demanda.

SHINE-TB, una prueba diagnóstica en el punto de atención desarrollada por investigadores de la Universidad de Princeton (Princeton, NJ, EUA), detecta rápidamente la tuberculosis en el esputo sin necesidad de equipos costosos. La prueba integra ensayos CRISPR Cas13a/Cas12a optimizados con un procesamiento eficiente de muestras para identificar dos elementos conservados del patógeno de la tuberculosis. Creada a partir de la plataforma de diagnóstico SHINE, es la primera prueba que combina la amplificación y detección de la polimerasa recombinasa, a la vez que es compatible con el flujo lateral y la liofilización para su uso en campo.

SHINE-TB integra dos reacciones paralelas en un solo paso: un ensayo de Cas13a para detectar las secuencias IS6110 e IS1081 en el genoma de la tuberculosis, y un ensayo de Cas12a para detectar ADN humano como control interno. El método de amplificación isotérmica elimina la necesidad de costosos termocicladores, y el ensayo requiere solo 100 μl de esputo por extracción y 2 μl por reacción. Este diseño lo hace ideal para entornos con alta carga de trabajo y bajos recursos.

En la validación de laboratorio, el ensayo alcanzó límites de detección de 69,0 UFC/ml para Mtb H37Rv y 80,5 UFC/ml para Mycobacterium bovis BCG en esputo enriquecido, sin reactividad cruzada con otras bacterias u hongos. En pruebas clínicas con 13 muestras de esputo con baciloscopia positiva, demostró una especificidad del 100 % y una sensibilidad del 100 % en comparación con el cultivo, según el estudio publicado en Science Advances.

La prueba cumple con los criterios de referencia de la Organización Mundial de la Salud para el perfil de producto objetivo para el diagnóstico de la tuberculosis, incluyendo una sensibilidad mínima del 85 % para uso en el punto de atención cercano y del 90 % para entornos de baja complejidad. Su compatibilidad con formatos de flujo lateral y reactivos liofilizados estables la posiciona para su implementación en centros de salud remotos o con equipamiento insuficiente, acercándola un paso más al diagnóstico accesible y fiable de la tuberculosis.

"Nuestro sencillo ensayo de un solo paso proporciona una detección robusta de Mtb, acercándonos un paso más a un diagnóstico de tuberculosis accesible y confiable", afirmaron los autores.