Se evaluaron diferentes kits y métodos PCR para diagnóstico de malaria

La malaria es una enfermedad infecciosa considerada como una de las mayores causas de mortalidad en las zonas endémicas. Esta enfermedad potencialmente mortal necesita ser diagnosticada y tratada rápidamente. Las herramientas de diagnóstico estándar son la microscopía de frotis de sangre gruesa y las pruebas de diagnóstico rápido inmunocromatográficas.

Sin embargo, estos métodos carecen de sensibilidad especialmente en casos de parasitemia baja e infecciones no falciparum. Por lo tanto, es pronunciada la necesidad de herramientas de diagnóstico más precisas y fiables, como los métodos basados en la reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real que han demostrado una mayor sensibilidad, especialmente en la detección de la malaria.

Científicos del Hôpital Bichat - Claude Bernard (París, Francia) realizaron un estudio sobre 183 muestras de sangre recibidas para diagnóstico experto en el Centro Nacional de Referencia de Malaria de Francia (FNMRC). El equipo evaluó la sensibilidad y la especificidad de dos kits comerciales de qPCR para la malaria y dos qPCR desarrollados internamente en comparación con LAMP.

Las muestras se analizaron mediante cuatro métodos diferentes de qPCR: la prueba Ampliquick Malaria (Biosynex SA, Illkirch-Graffenstaden Francia), la prueba BioEvolution Plasmodium Typage (Bio-Evolution, Île-de-France, Francia), las pruebas qPCR internas HRM y TaqMan. La especificidad y sensibilidad de cada método y sus intervalos de confianza se determinaron con el ensayo basado en LAMP Alethia Malaria (Meridian Bioscience, Cincinnati, OH, EUA), utilizado como referencia para el diagnóstico de malaria. La precisión del diagnóstico de especies de la prueba Ampliquick Malaria y las dos qPCR internas también se evaluó utilizando la prueba BioEvolution Plasmodium Typage como método de referencia para la identificación de especies.

Los investigadores informaron que, en comparación con LAMP, una prueba con excelentes resultados de diagnóstico, las dos qPCR desarrolladas internamente fueron las más sensibles (sensibilidad del 100 % para la qPCR interna TaqMan y del 98,1 % para la prueba interna de análisis de la curva de fusión de alta resolución (HRM) qPCR), seguido de los dos kits comerciales: el Biosynex Ampliquick Malaria test (sensibilidad al 97,2 %) y el BioEvolution Plasmodium Typage (sensibilidad al 95,4 %). Además, con las qPCR internas pudieron confirmar una infección por Plasmodium falciparum en muestras microscópicamente negativas que no fueron detectadas por kits de qPCR comerciales. Esto demostró que los genes var de P. falciparum utilizados en estas qPCR internas son objetivos más confiables que el sRNA 18S comúnmente utilizado en la mayoría de los métodos qPCR desarrollados para el diagnóstico de la malaria.

El análisis con el kit Bio-Evolution mostró 135 muestras positivas y 48 negativas. De las 135 muestras positivas: 73 fueron identificadas como P. falciparum, 36 fueron identificadas como P. ovale spp, ocho fueron identificadas como P. vivax, 15 fueron identificadas como P. malariae, dos infecciones mixtas por P. falciparum y P. malariae y una infección mixta P. falciparum, P. malariae y P. ovale. Los 147 aislamientos probados con LAMP se evaluaron con los cuatro métodos diferentes de qPCR. Las 43 muestras LAMP negativas también fueron negativas por los cuatro métodos, lo que les proporciona un 100 % de especificidad. De las 104 muestras positivas, cinco no fueron detectadas por Plasmodium Typage (Bio-Evolution), tres por Ampliquick Malaria y dos por HRM-qPCR, pero todas con TaqMan-qPCR interno.

Los autores concluyeron que, en general, sus resultados acentúan el papel que podrían desempeñar los métodos moleculares en la detección de la malaria. Esto puede representar una herramienta útil para otros laboratorios que busquen implementar métodos de diagnóstico molecular en sus análisis de rutina, lo que podría ser fundamental para la detección y tratamiento de portadores de malaria e incluso para la erradicación de esta enfermedad. El estudio fue publicado el 27 de junio de 2022 en Malaria Journal .

Enlaces relacionados:
Hospital Bichat - Claude Bernard
Biosynex SA
Bio-Evolución
Meridian Bioscience