Nuevo método de tinción para muestras de microscopio electrónico más seguro y rentable
Actualizado el 16 Jun 2022
La técnica de tinción con microscopía electrónica para muestras biológicas utilizando acetato de uranilo (AU) se informó por primera vez en 1958 y se ha utilizado en instalaciones de microscopía electrónica en todo el mundo debido a su simplicidad y resultados de tinción óptimos. Sin embargo, en los últimos años, las normas internacionales sobre el uso, adquisición, almacenamiento y eliminación de compuestos de uranio se han vuelto cada vez más estrictas debido a que el uranio se utiliza como material nuclear para armas. En este ambiente, se han esperado durante mucho tiempo métodos de tinción alternativos en el campo de la investigación biológica, y se han propuesto varios, pero ninguno ha sido una alternativa eficaz. En este contexto, se han esperado durante mucho tiempo métodos de tinción alternativos en el campo de la investigación microscópica electrónica biomédica, y se han propuesto varios, aunque ninguno ha sido una alternativa eficaz. Ahora, los investigadores han desarrollado un nuevo método de tinción para muestras de microscopio electrónico basado en doble tinción con hematoxilina, que se usa ampliamente como agente de tinción para microscopía óptica, y solución de plomo. Se espera que el nuevo método reemplace el método convencional de doble tinción con acetato de uranio y solución de plomo y sea una mejor opción en términos de seguridad, costo y facilidad de manejo.
Para desarrollar un método de tinción alternativo al AU, seguro y fácil de manejar para cortes ultrafinos en microscopía electrónica, investigadores de la Universidad Tecnológica de Tokio (Tokio, Japón) examinaron varios tintes disponibles comercialmente para microscopía óptica. Los investigadores encontraron que la tinción doble con hematoxilina de Mayer (MH), que se usa comúnmente como agente de tinción en microscopía óptica, y la solución de plomo (Pb), mostraron propiedades de tinción equivalentes a las de la tinción doble microscópica electrónica convencional con UA y Pb en varios tejidos y células.
Otros orgánulos celulares, como la cromatina nuclear, las estructuras de la membrana plasmática, los ribosomas, el glucógeno, las gotitas de lípidos, el aparato de adhesión celular y el(los) sistema(s) citoesquelético(s), se tiñeron con alto contraste utilizando el método de tinción MH. La tinción de la membrana plasmática en todas las muestras también fue satisfactoria. Las imágenes de electrones retrodispersados de secciones semidelgadas de riñón de ratón de 200 nm observadas con un microscopio electrónico de barrido de emisión de campo también mostraron que las técnicas de tinción con MH y Pb proporcionaron una imagen de área amplia y de alta calidad de los túbulos corticales renales y el glomérulo renal.
MH es una solución de colorante ampliamente utilizada para teñir secciones de parafina de muestras clínicas de diagnóstico y tiene las ventajas de ser de bajo costo, un suministro estable como producto comercial y una alta seguridad de la solución de desecho. Por otro lado, las "Normas Básicas Internacionales de Seguridad para la Protección contra la Radiación Ionizante y para la Seguridad de las Fuentes de Radiación" (BSS) de la Agencia Internacional de Energía Atómica han establecido niveles de exención específicos, y se están desarrollando nuevas regulaciones para materiales radiactivos a nivel internacional a través de la legislación. Según los resultados de este estudio, se espera que la tinción doble con MH y Pb se convierta en una alternativa útil al método de tinción que usa AU radiactivo en términos de compra, manejo, uso, almacenamiento y tratamiento de desechos líquidos de reactivos.
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Universidad Tecnológica de Tokio
