Metodología simplificada para análisis molecular del cólera

Se han evaluado métodos simplificados para la conservación de las muestras para la caracterización molecular utilizando análisis multi-locus variables-número tándem-análisis de repetición (MLVA) para la diferenciación de los genotipos de Vibrio cholerae.

V. cholerae es endémico en el sur de Asia y África, donde los brotes de cólera están muy extendidos y están particularmente asociados con la pobreza y la falta de saneamiento; el conocimiento de la diversidad genética de los aislados toxigénicos de V. cholerae sigue siendo escaso.


Científicos de la Facultad de Salud Pública Bloomberg de la Universidad Johns Hopkins (Baltimore, MD, EUA) y sus colegas recolectaron muestras de heces de dos brotes geográficamente definidos en el extremo norte de Camerún (FNC) en junio de 2014 y octubre 2014. Cuarenta y siete aislados de V. cholerae y 18 muestras clínicas de heces después del enriquecimiento en caldo, de los brotes de cólera en Camerún, fueron conservadas en papel de filtro Whatman para la extracción de ADN. Además, se analizaron muestras de conveniencia de 14 aislados de Filipinas y ocho de Mozambique.

Las muestras fecales cameruneses fueron estudiadas para V. cholerae O1 y O139 utilizando un método de tira reactiva enriquecida (Crystal VC, Span Diagnóstico; Udhna, Surat, India). Para evaluar el uso de los métodos simplificados de conservación de muestras y de envío de muestras, también se conservó la muestra enriquecida en agua de peptona alcalina (APW), para cada deposición, en papel de filtro Whatman 903 (GE Healthcare Ltd.; Cardiff, Reino Unido) para ser analizada para V. cholerae utilizando métodos moleculares. Una o dos gotas de la muestra fue dividida en alícuotas enriquecidos en el papel de filtro Whatman y se dejaron secar al aire; los papeles de filtro fueron almacenados en bolsas de plástico individuales a temperatura ambiente hasta que fueron enviados para la extracción de ADN y el procesamiento por reacción en cadena de la polimerasa (PCR).

Todos los 87 ADNs fueron analizados con éxito incluyendo 16 muestras pareadas, uno un aislado cultivado y el otro la muestra enriquecida de la que se había recogido el aislado. Los resultados genotípicos fueron idénticos entre los 15 especímenes enriquecidos y sus aislamientos por cultivo y el otro par difería en un solo locus. Dos complejos clonales estrechamente relacionados, pero distintos, fueron identificados entre los especímenes de Camerún a partir de 2014. Cuando se utilizó este método de conservación de ADN simplificado, el equipo fue capaz de caracterizar molecularmente aislados de un brote en curso.

Los autores concluyeron que la recolección de V. cholerae utilizando métodos de laboratorio simplificados en entornos remotos y de bajos recursos permite la posterior caracterización molecular avanzada de V. cholerae O1. Estos métodos de conservación simplificados de ADN identifican V. cholerae y hacen posible la información oportuna sobre la diversidad genética de V. cholerae. El estudio fue publicado el 6 de enero de 2016, en la revista Public Library of Science Neglected Tropical Diseases.

Enlaces relacionados:

Johns Hopkins University Bloomberg School of Public Health 
Span Diagnostics
GE Healthcare Ltd