Ensayan diagnóstico del dengue en muestras de orina y saliva

El dengue es la enfermedad más importante transmitida por artrópodos que afecta a los seres humanos, lo que representa una carga enorme de salud pública en los países afectados. Los síntomas suelen ser inespecíficos, de ahí la necesidad de un diagnóstico precoz, sensible y específico del dengue para un manejo adecuado.

El diagnóstico directo de la infección por el virus del dengue (DENV) se basa en el aislamiento del virus, la detección del genoma viral mediante la reacción en cadena de la polimerasa con transcripción inversa (RT-PCR) o la detección del antígeno de la proteína no estructural 1 (NS1).


Los científicos del Instituto Pasteur du Cambodge (Phnom Penh, Camboya) recopilaron y analizaron un total de 913 muestras de plasma, 1.555 de orina y 1.564 muestras de saliva obtenidas de 267 pacientes con infección confirmada por dengue y con registros completos. También se utilizaron las muestras clínicas obtenidas de 20 pacientes hospitalizados por una enfermedad febril, no dengue, para evaluar la especificidad de los diferentes métodos de diagnóstico en muestras de orina y de saliva. Estos controles no mostraron evidencia biológica de una infección actual por el DENV (pruebas negativas para DENV por qRT-PCR, prueba NS1 negativa y ausencia de anticuerpos anti-DENV en el plasma emparejado.

Se utilizó un ensayo ELISA para detectar NS1 en el plasma, la orina no concentrada y en la saliva sin diluir. En el plasma y en la orina, la proteína NS1 fue detectada mediante un método ELISA de dos pasos. También se utilizaron pruebas ELISA de captura, producidas por los propios laboratorios, para detectar anti-DENV IgM (MAC-ELISA) e IgA (AAC-ELISA) en el plasma, la orina no concentrada y las muestras de saliva sin diluir. El ácido ribonucleico (ARN) viral fue extraído del plasma, a partir de saliva mezclada con medio de transporte viral (VTM) y a partir de orina concentrada, utilizando el Mini kit QIAmp Viral ARN (Qiagen; Hilden, Alemania). Las muestras de orina fueron concentradas usando el dispositivo 100K Microsep e ultrafiltración (Pall Corporation; Port Washington, NY, EUA) para convertir un volumen inicial de 5 ml de orina en un volumen final de 280 µL de orina concentrada.

Los ensayos de RT-PCR y NS1 demostraron una sensibilidad general de 85,4%/63,4%, 41,6%/14,5%, y 39%/28,3%, en las muestras de plasma, orina y saliva, respectivamente. Cuando se recogieron muestras de orina y saliva en los mismos momentos de tiempo y se analizaron al mismo tiempo, la sensibilidad diagnóstica de los ensayos de detección de ARN y NS1 fue 69,1% y 34,4%, respectivamente. Los análisis de detección de IgG/IgA tenían una sensibilidad global del 54,4%/37,4%, 38,5%/26,8% y 52,9%/28,6% en plasma, orina y muestras de saliva, respectivamente. Las IgM fueron detectadas en 38,1% y 36% de las muestras de plasma y de saliva pero nunca en la orina.

Los autores concluyen que, aunque el desempeño de los diferentes métodos de diagnóstico no es tan bueno en la saliva y la orina como en muestras de plasma, los resultados obtenidos por las QRT-PCR y por los anticuerpos ELISA anti-DENV, bien podrían justificar el uso de estos dos fluidos corporales para detectar la infección por dengue en situaciones en las que la recogida de muestras de sangre no es posible. El estudio fue publicado el 25 de septiembre de 2015, en la revista Public Library of Science Neglected Tropical Diseases.

Enlaces relacionados:

Institut Pasteur du Cambodge
Qiagen
Pall Corporation