Cuantifican levaduras patógenas mediante citometría de flujo

Se ha investigado un método de citometría de flujo, con una sola coloración, para cuantificar Candida albicans, como una alternativa al recuento viable estándar en placa.

En el ámbito clínico, se usan los recuentos viables por placa (VPC) para determinar la carga microbiana del paciente, pero es un trabajo laborioso, que consume tiempo y que sólo permite la detección de los organismos que crecen fácilmente en medios sólidos.

Los microbiólogos de la Universidad de Amberes (Bélgica) investigaron un método de citometría de flujo, de una sola coloración, para el recuento de viables de células de C. albicans. Esta estrategia, de una sola coloración, se basa en las diferencias en la intensidad de fluorescencia entre las células viables y no viables. En este estudio, las células con una membrana intacta se consideran vivas, mientras que las células con una membrana dañada, se definen como muertas.

Las muestras de células fueron coloreadas con yoduro de TO-PRO-3 (TP3; Molecular Probes, OR, EUA) que tiene un máximo de excitación a 642 nm, con emisión a 661 nm. Todos los estudios de citometría de flujo (FCM) fueron realizados utilizando un citómetro de flujo FACSCalibur (BD Biosciences, NJ, EUA) equipado con un láser de diodo rojo (excitación a 633 nm) y un filtro de paso de banda midiendo la fluorescencia roja (FL4, rango 653-669 nm). Se añadieron, a las muestras, perlas de recuento absoluto, CountBright, de Molecular Probes como un patrón interno para calcular el volumen exacto, analizado por el citómetro de flujo.

Los autores concluyeron que la cuantificación con FCM de células viables usando TP3 es una buena alternativa para el VPC más largo y laborioso. En comparación con otras técnicas de FCM, este procedimiento, que usa una sola coloración es simple de aplicar y rentable ya que sólo es necesario agregar un colorante. Por otra parte, el perfil único de excitación/emisión de TP3 permite la aplicación de colorantes adicionales para evaluar otros parámetros celulares con un mínimo solapamiento espectral. El estudio está previsto para publicación escrita el 15 de febrero de 2013, en la revista Journal of Microbiological Methods.

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University of Antwerp

Molecular Probes

BD Biosciences