Impacto de factores preanalíticos en la concentración de calprotectina en heces

En la enfermedad inflamatoria intestinal (EII), la medición de la calprotectina fecal es cada vez más importante en la selección de pacientes para la endoscopia diagnóstica, el control de la actividad de la enfermedad y la evaluación de la respuesta al tratamiento.

La calprotectina es una proteína fijadora de calcio producida principalmente en los neutrófilos. Se dice que es resistente a la degradación bacteriana en el colon, y la literatura afirma casi unánimemente que la calprotectina es estable hasta siete días a temperatura ambiente sin tampón de conservación.

Imagen: La prueba ELISA Bühlmann fCAL es un kit de ensayo basado en microtitres para la determinación de calprotectina en muestras fecales (Fotografía cortesía de Bühlmann Laboratories)

Químicos clínicos del Centro Médico Universitario de Groningen (Groningen, Países Bajos) y sus colegas de otras instituciones evaluaron el impacto de las condiciones de almacenamiento preanalíticas en la confiabilidad de las pruebas de calprotectina utilizando cinco inmunoensayos de calprotectina diferentes. Los científicos distribuyeron 45 alícuotas de heces anonimizadas congeladas entre los tres centros participantes. Evaluaron la concentración de calprotectina a lo largo del tiempo en cuatro condiciones, incluidas (a) heces nativas no tratadas almacenadas a temperatura ambiente (NRT), (b), extracto de heces almacenadas a temperatura ambiente, (c), heces nativas no tratadas almacenadas a 4 °C, y (d), extracto de heces almacenado a 4 °C.

Los cinco ensayos fueron: la prueba Bühlmann fCAL turbo (Bühlmann Laboratories AG, Schönenbuch Suiza) es un inmunoensayo turbidimétrico mejorado con partículas realizado en un instrumento COBAS 6000 e501 (Roche Diagnostics, Rotkreuz, Suiza); el ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas fCAL de Bühlmann (ELISA; Bühlmann Laboratories AG) es un ELISA tipo sándwich que se realiza y analiza con un robot ELISA DS2 Dynex (Dynex, Chantilly, VA, EUA); la prueba CALliaGold (Sentinel CH, Milán, Italia) es un inmunoensayo turbidimétrico mejorado con partículas (PETIA) y el análisis se realizó con un analizador SENTiFIT 270 (Sysmex Europe SE, Norderstedt, Alemania).

Los otros dos ensayos fueron la prueba EliA Calprotectin, que es un inmunoensayo enzimático de fluorescencia y el análisis se realizó con el instrumento Phadia 250 (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, EUA); y QUANTA Flash Calprotectin (Inova Diagnostics, San Diego, CA, EUA), un inmunoensayo quimioluminiscente y el análisis se realizó en el instrumento  BIO FLASH (Werfen, Bedford, MA, EUA).

Los investigadores informaron que las concentraciones de calprotectina disminuyeron con el tiempo en todas las condiciones preanalíticas con todos los ensayos, excepto para las heces extraídas almacenadas a 4 °C. La tasa de disminución fue mayor en las heces no tratadas mantenidas a temperatura ambiente, alcanzando una diferencia significativa desde el inicio ya después de un día. En las heces extraídas mantenidas a temperatura ambiente, se alcanzó una diferencia significativa desde el inicio después de dos días, y en las heces no tratadas a 4 °C, después de cuatro días. Sin embargo, los resultados difirieron significativamente entre los ensayos. Después de cuatro días de almacenamiento a temperatura ambiente, la disminución media de calprotectina desde el valor inicial difería entre un 30 % y un 60 %, dependiendo del ensayo utilizado. En la mayoría de las muestras, pero no en todas, la prueba CALiaGold produjo los niveles más altos de calprotectina y la prueba QUANTA flash, los niveles más bajos de calprotectina.

Los autores concluyen que la concentración de calprotectina fecal en las muestras de heces disminuye con el tiempo y la tasa de disminución es mayor a temperaturas más altas. En las heces extraídas almacenadas a 4 °C, la calprotectina es la más estable. Depende del ensayo cuánto tiempo las heces extraídas almacenadas a 4 °C dan resultados fiables. El estudio se publicó en la edición de noviembre de 2022 de The Journal of Applied Laboratory Medicine.

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