Inmunoensayo detecta fiebre severa con virus del síndrome de trombocitopenia

Por el equipo editorial de LabMedica en español
Actualizado el 08 Jun 2016

El síndrome de trombocitopenia con fiebre severa (SFTS) es una enfermedad infecciosa transmitida por garrapatas, con una alta tasa de mortalidad, y es causada por el virus SFTS (SFTSV) y la enfermedad es endémica en China, Corea del Sur y Japón.

Imagen A: El lector de microplacas Modelo 680 (Fotografía cortesía de Bio-Rad Laboratories).

Imagen B: Una micrografía electrónica de barrido (SEM) del virus del síndrome de trombocitopenia con fiebre severa (Fotografía cortesía del Instituto Nacional Japonés de Enfermedades Infecciosas).

Se sabe que el nivel de ácido ribonucleico (ARN) viral en el suero de los pacientes con SFTS está fuertemente asociado con los resultados por lo que se requiere el diagnóstico virológico SFTS, con alta sensibilidad y especificidad en las zonas endémicas de la enfermedad.

Los científicos del Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas de Japón (Tokio, Japón) y sus colegas recolectaron 63 muestras de suero de 55 pacientes en fase aguda con sospecha de SFTS, en Japón. Se realizó la detección de los genes virales usando la reacción cuantitativa en cadena de la polimerasa con transcripción inversa (QRT-PCR) y la detección de anticuerpos inmunoglobulina G (IgG), contra el virus, con un análisis inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) y/o de inmunofluorescencia indirecta (IFA), para diagnosticar el SFTS. De 55 pacientes, 34 de ellos fueron diagnosticados como con SFTSV. Las muestras de suero obtenidas de 18 donantes sanos fueron utilizadas para establecer el valor de corte de la prueba IgG ELISA. Las muestras de suero utilizadas para IgG ELISA fueron inactivadas bajo la luz UV en una cabina de bioseguridad, durante una hora.

Los investigadores generaron anticuerpos monoclonales (MAbs) nuevos contra la proteína de la nucleocápside (N) del SFTSV y desarrollaron un análisis inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA), de captura de antígenos (Ag), en sándwich, para la detección de la proteína N del SFTSV utilizando MAb y anticuerpos policlonales como los anticuerpos de captura y de detección, respectivamente. Las pruebas ELISA, de captura de Ag, se leyeron usando una densidad óptica a 405 nm (OD405) midiendo contra una referencia de 490 nm usando un lector de microplacas Modelo 680 (Bio-Rad Laboratories Inc .; Hércules, CA, EUA). El sistema de Ag-captura fue capaz de detectar al menos 350 a 1220 dosis infectivas de cultivo celular 50 (TCID50)/100 μL/pozo, de los sobrenadantes de cultivo de varias cepas de SFTSV.

Todas las 24 muestras de suero (100%) que contenían un número alto de copias de ARN viral, de más de 105 copias/mL) mostraron una reacción positiva en el Ag-ELISA de captura, mientras que 12 de las 15 muestras de suero (80%) que contenían un número bajo de copias del ARN viral (menos de 105 copias/mL) mostraron una reacción negativa en el Ag ELISA de captura. Entre estas 12 muestras negativas con el Ag-captura ELISA, nueve (75%) dieron resultados positivos para anticuerpos IgG contra SFTSV. Los autores concluyen que el nuevo análisis ELISA, desarrollado, de captura de Ag, es útil para el diagnóstico de SFTS en pacientes que se encuentran en la fase aguda con altos niveles de viremia. El estudio fue publicado el 5 de abril de 2016, en la revista Public Library of Science Neglected Tropical Diseases.

Enlaces relacionados:

Japanese National Institute of Infectious Diseases

Bio-Rad Laboratories