Prueba genética precisa identifica deficiencia de antígeno 2 de neutrófilo humano

El antígeno de neutrófilo humano 2 (HNA-2) es uno de los antígenos de neutrófilos más importantes implicados en una serie de trastornos humanos. La deficiencia de HNA-2 o HNA-2 nulo es un fenotipo común que se observa en el 3 % al 5 % de los ciudadanos estadounidenses.

Los individuos HNA-2 nulos corren el riesgo de producir isoanticuerpos (o aloanticuerpos) que desempeñan funciones importantes en la lesión pulmonar aguda relacionada con transfusiones, la neutropenia inmunitaria y el fracaso del injerto de médula ósea. CD177 que codifica SNP 787A > T (c.787A > T) es el determinante genético más importante para la deficiencia de HNA-2 que implica trastornos mieloproliferativos humanos.

Científicos biomédicos de la Universidad de Minnesota (St. Paul, MN, EUA) reclutaron donantes de sangre sanos en el Memorial Blood Center en St. Paul, MN, EUA). La edad de los donantes sanos de control osciló entre 19 y 84 años. El ADN genómico humano se aisló de sangre periférica anticoagulada con EDTA utilizando el kit Wizard Genomic DNA Purification (Promega, Madison, WI, EUA).

Se determinó la expresión de HNA-2 y el porcentaje de neutrófilos HNA-2+ en donantes de sangre sanos. Las muestras de sangre entera fresca se tiñeron con mAb MEM-166 de ratón anti- CD177 humano (HNA-2) conjugado con FITC o control de isotipo mIgG1 conjugado con FITC y se analizaron en un citómetro de flujo FACS Canto (BD Biosciences, San José, CA, EUA) . Se utilizó una nueva estrategia de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para determinar los genotipos del CD177 SNP c.787A > T.

En el ensayo de PCR simplificado, todos los cebadores específicos de alelo y los cebadores de control interno se incluyeron en la misma reacción, lo que garantiza la fiabilidad de la prueba. Además, se desarrolló un nuevo ensayo TaqMan anidado de alto rendimiento para determinar los genotipos de c.787A > T para el análisis genético de poblaciones grandes de deficiencia de HNA-2. El termociclador de 96 pocillos Veriti de Applied Biosystems se utilizó para las reacciones de PCR (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, EUA).

Los científicos informaron que los genotipos CD177 SNP c787A > T de 396 sujetos eran 100 % concordantes entre el método de reacción de PCR simple, el ensayo TaqMan anidado y el análisis de secuenciación de Sanger. De 396 sujetos, los 18 donantes con el genotipo homocigoto CD177 STP eran nulos para HNA-2.

Los autores concluyeron que el nuevo ensayo de genotipado basado en PCR es preciso para identificar individuos con deficiencia de HNA-2 y es adecuado para laboratorios clínicos. Además, el innovador ensayo TaqMan anidado de alto rendimiento será útil para detección de poblaciones a gran escala y los estudios genéticos de la deficiencia de HNA-2. El estudio fue publicado el 29 de octubre de 2022 en la revista Transfusion Medicine.

Enlaces relacionados:
Universidad de Minnesota
Memorial Blood Center
Promega
BD Biosciences
Thermo Fisher Scientific