Análisis simplificado mejora la detección prenatal de la alfa-talasemia

La alfa-talasemia es un grupo de trastornos de hemoglobina (Hb) heredados de manera recesiva que resultan en la síntesis disminuida o ausente de las cadenas de α-globina, que afectan hasta al 5% de la población mundial, predominantemente en los países costeros mediterráneos, el sudeste asiático, algunos países africanos y el sur de China.

La talasemia es un grupo de trastornos sanguíneos hereditarios que reduce la capacidad de la sangre para transportar oxígeno por todo el cuerpo. La gravedad puede variar de benigna a potencialmente mortal; por lo tanto, es importante identificar a los bebés que puedan desarrollar síntomas asociados con la talasemia, lo antes posible, así como a los padres que son portadores. Esto requiere la disponibilidad de herramientas de diagnóstico molecular prácticas y precisas.


Científicos de la Universidad Médica del Sur (Guangzhou, China) desarrollaron un nuevo ensayo rápido y exacto, para la genotipificación de la alfa-talasemia no delecional, basado en un análisis de curva de fusión de una reacción en cadena de la polimerasa asimétrica (PCR) anidada, en un solo paso, que puede mejorar el diagnóstico prenatal, el cribado neonatal y el cribado a gran escala de las poblaciones. Para evaluar el ensayo de detección masiva, se seleccionaron al azar 1.250 muestras de sangre remitidas a su laboratorio para el diagnóstico molecular de la α-talasemia. Las muestras de ADN genómico (ADNg) se extrajeron de los linfocitos de sangre periférica usando el kit de ADN de sangre TIANamp (TianGen Biotech Co, Ltd, Beijing, China). El ensayo fue un método de genotipificación de tubo cerrado en un solo paso que incluyó un análisis de curva de fusión y PCR asimétrica anidada que se procesa en una plataforma de PCR en tiempo real, Bio-Rad CFX96 (Bio-Rad, Hércules, CA, EUA).

Los investigadores probaron la capacidad del nuevo ensayo para detectar cinco mutaciones de alfa-talasemia no delecionales. Las cinco mutaciones se identificaron con exactitud con una tasa de concordancia del 100% en un análisis ciego de 255 muestras con genotipos conocidos, según lo determinado por otros métodos analíticos, como gap-PCR, PCR-reverse dot blot (RDB) o secuenciación de Sanger. Los investigadores también probaron la capacidad del nuevo ensayo para hacer el cribado de grandes poblaciones. Después de analizar 1.250 muestras de sangre, el ensayo mostró una sensibilidad y especificidad del 100% para todas las mutaciones específicas. El tiempo de análisis general con el nuevo ensayo fue de menos de 2,5 horas. Esto es considerablemente más rápido que otros métodos de análisis de genética molecular, como la secuenciación de Sanger, que requiere 380 minutos, o la RDB, que se demora 300 minutos.

Wanjun Zhou, PhD, médico genetista y autor principal del estudio, dijo: “Estos otros métodos no son adecuados para uso en programas de cribado a gran escala porque tienen limitaciones tales como operación engorrosa, bajo rendimiento, interpretación subjetiva y posible contaminación de laboratorio causados por la operación de tubo abierto posterior a la PCR. Nuestros resultados demuestran que este nuevo ensayo es exacto, confiable, simple y rápido y puede cumplir con los requisitos para el diagnóstico clínico y la detección masiva de la alfa-talasemia no delecional”.

Los autores concluyeron que se estableció un ensayo de análisis de fusión de PCR asimétrica anidada para la genotipificación rápida y exacta de la α-talasemia no delecional, incluidas las mutaciones de WS (HBA2: c.369C> G), QS (HBA2: c.377T > C), CS (HBA2: c.427T> C), CD30 (HBA2: c.91_93delGAG) y CD31 (HBA2: c. 95G> A). Además, la estrategia de este estudio puede superar eficazmente el cuello de botella de una estructura secundaria rica en GC y alta homología. El estudio fue publicado el 29 de mayo de 2020 en la revista The Journal of Molecular Diagnostics.

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