Ensayo de antígenos detecta enfermedades transmitidas por garrapatas

Las rickettsiosis transmitidas por garrapatas (SFR) siguen representando una amenaza importante para personas sanas, ya que causan enfermedades graves y muertes debido a la falta de una prueba diagnóstica de laboratorio confiable y oportuna. La ausencia de pruebas diagnósticas específicas y convenientes para la fase aguda de las SFR contribuye a su dificultad de diagnóstico y a su subnotificación. Actualmente, el estándar de oro para diagnosticar las rickettsiosis transmitidas por garrapatas consiste en detectar anticuerpos contra las rickettsias en el suero mediante un ensayo de inmunofluorescencia indirecta (IFI). Sin embargo, esta respuesta de anticuerpos suele aparecer entre 7 y 10 días después del inicio de la enfermedad, cuando suelen producirse muertes. Si bien la detección molecular del ADN bacteriano y el análisis inmunohistoquímico de los antígenos rickettsiales en biopsias de piel pueden proporcionar un diagnóstico temprano, la aparición de erupciones cutáneas y su momento de aparición no son confiables. Además, muchos laboratorios hospitalarios no realizan pruebas de diagnóstico molecular rápido para las SFR. Los investigadores han identificado un biomarcador para las SFR, lo que ha llevado al desarrollo de un prototipo de prueba de laboratorio destinada a detectar este biomarcador para un diagnóstico más preciso.

Investigadores de la Universidad de Houston (Houston, TX, EUA) han identificado una proteína rickettsial, RC0497, en el sobrenadante de células endoteliales infectadas con R. conorii. RC0497, una supuesta amidasa de N-acetilmuramoil-L-alanina, está altamente conservada en varias especies de SFG. Los investigadores demostraron que RC0497 está presente en la sangre tanto de modelos de ratones infectados con fiebre maculosa mediterránea (MSF) como de pacientes con MSF. En este estudio, los investigadores probaron la hipótesis de que la detección de RC0497 a través de un ensayo de flujo lateral rápido (LFA) podría proporcionar una herramienta de diagnóstico oportuna, mejorando potencialmente los resultados del tratamiento para las SFR graves. El equipo utilizó dos modelos experimentales de SFR (ratones C3H/HeN infectados con R. conorii y cobayas infectados con R. rickettsii) que replican los cambios fisiopatológicos observados en pacientes con fiebre maculosa de las Montañas Rocosas (RMSF). Midieron las concentraciones de RC0497 en varias etapas de la enfermedad mediante espectrometría de masas (EM) utilizando muestras de sangre de animales infectados.

Imagen: la prueba rápida de detección de antígeno puede diagnosticar fiebre rickettsiosis mortal de las Montañas Rocosas transmitida por garrapatas (foto cortesía de 123RF)

Utilizando anticuerpos específicos contra RC0497 y nanopartículas de quelato de europio, los investigadores desarrollaron un LFA de nanopartículas de europio (EuNP LFA) para detectar este biomarcador de SFR. El ensayo demostró una alta sensibilidad y especificidad analíticas en muestras de suero de animales infectados experimentalmente en las primeras etapas de la infección, cuando los antibióticos aún podían controlar las rickettsias. Los resultados sugieren que la detección oportuna de RC0497 utilizando el LFA de europio podría guiar el tratamiento, mejorando significativamente los resultados de la infección. Esto representa el primer prototipo de prueba de detección rápida de antígenos basado en una plataforma de ensayo de flujo lateral para diagnosticar SFR potencialmente mortales de manera oportuna.

La investigación confirmó que un antígeno rickettsial, detectable mediante una prueba sencilla, está presente en la circulación de animales infectados. A diferencia de las pruebas serológicas utilizadas para detectar la exposición anterior a especies de rickettsias potencialmente no patógenas, el LFA RC0497 puede distinguir las infecciones activas. Esto mejorará el diagnóstico clínico y la vigilancia epidemiológica. Aunque se necesita una mayor validación con muestras de pacientes, el equipo ha establecido una prueba de concepto para un LFA que podría convertirse en una herramienta de diagnóstico en el punto de atención para su uso en entornos del mundo real.