Desarrollan análisis RT-LAMP para el SARS-CoV-2
Por el equipo editorial de LabMedica en español
Actualizado el 21 Apr 2020
El SARS-CoV-2 es el patógeno viral causante de la COVID-19, y el diagnóstico de COVID-19 se puede hacer mediante tomografía computarizada de los pacientes sospechosos y se realiza una prueba de laboratorio confirmatoria utilizando métodos publicados que usan reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real cuantitativa (RT-qPCR ).Actualizado el 21 Apr 2020
Aunque los métodos RT-qPCR se utilizan como el estándar de oro para la detección de patógenos debido a su alta sensibilidad y especificidad, todavía tienen algunas falencias. Para superar cualquier restricción de la RT-qPCR y aún detectar ácidos nucleicos de patógenos, se han desarrollado métodos de amplificación isotérmica. Entre dichos métodos, el método de amplificación isotérmica mediada por bucle (LAMP) tiene algunas ventajas que se pueden aplicar para las pruebas de punto de atención (POCT). El ensayo LAMP, bien optimizado, muestra una sensibilidad comparable a la de la PCR, de menos de 10 copias por reacción.
Imagen: Resultados de la detección colorimétrica con el cristal violeta de Lauco (LCV) de las pruebas de límite de detección (LoD) para los conjuntos de cebadores, utilizados para la detección del SARS-CoV-2. Se utilizaron 20 U/reacción de transcriptasa inversa (Fotografía cortesía del Instituto de Investigación de Tecnología Química de Corea).
Los científicos del Instituto de Investigación de Tecnología Química de Corea (Daejeon, República de Corea) y sus colegas, desarrollaron y evaluaron ensayos de RT-LAMP para detectar el ARN genómico del SARS-CoV-2. El equipo utilizó ARN viral del SARS-CoV-2 que se preparó como se describió anteriormente. El ARN viral, hCoV-229E y hCoV-OC43, se aislaron de los medios de cultivo de células MRC-5 infectados y el ARN MERS-CoV se aisló del lisado de bolas de células de las células Vero infectadas. Para evaluar el número de copias genómicas de los ARN virales, las diluciones de los ARN estándar y los ARN virales en el tampón TE se sometieron a una RT-qPCR de un solo paso. Las reacciones de RT-qPCR se llevaron a cabo utilizando un instrumento LightCycler 96 (Roche Molecular Systems, Inc, Pleasanton, CA, EUA).
El equipo informó que los ensayos de RT-LAMP utilizados en su estudio pueden detectar desde 100 copias de ARN de SARS-CoV-2. Cinco de los siete conjuntos de cebadores mostraron amplificación específica para al menos una réplica de duplicado con una concentración de ADNc correspondiente a 1,7 x 101 copias de ARN de entrada. No se observó reactividad cruzada de los ensayos de RT-LAMP con otros coronavirus humanos. El método de cristal violeta de Lauco (LCV) se aplicó para lograr la detección colorimétrica de la reacción LAMP para su ensayo RT-LAMP, de modo que las pruebas se realizaran potencialmente con un mayor rendimiento.
Los autores concluyeron que desarrollaron ensayos de RT-LAMP altamente específicos para la detección de SARS-CoV-2. Los resultados de estos ensayos de RT-LAMP se pueden detectar dentro de los 30 minutos posteriores al comienzo de la reacción de amplificación. Además, proporcionaron condiciones de reacción optimizadas a las que se aplica el método de detección colorimétrica de LCV que se puede usar para las pruebas de punto de atención. El estudio fue publicado el 7 de abril de 2020 en la revista The Journal of Molecular Diagnostics.
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Instituto de Investigación de Tecnología Química de Corea
Roche Molecular Systems