La MS MALDI-TOF identifica el oomicto que causa la pitiosis

La pitiosis es una enfermedad infecciosa invasiva, difícil de tratar y potencialmente mortal causada por el microorganismo Pythium insidiosum, un miembro del grupo único de microorganismos similares a los hongos llamados oomicetos. La enfermedad ha sido reportada en todo el mundo.

En la última década, la espectrometría de masas de ionización con desorción láser asistida por matriz-tiempo de vuelo (MALDI-TOF MS) se ha convertido en una herramienta diagnóstica novedosa y poderosa para la identificación clínica de muchos de los microorganismos patógenos, incluidas las bacterias y los hongos.

Científicos de la Universidad Mahidol (Bangkok, Tailandia) aislaron un total de 13 cepas de P. insidiosum, aisladas de ocho humanos y de cinco animales con pitiosis, de diferentes ubicaciones geográficas. Todos los organismos se conservaron en agar de dextrosa Sabouraud a 25°C. Varias porciones pequeñas de una colonia de cada organismo se transfirieron a un matraz de 50 mL que contenía 10 ml de caldo de Sabouraud dextrosa y se incubaron a 37°C durante una semana, antes de cosechar el material del hongo para realizar la extracción de proteínas.

La proteína se extrajo de los organismos recolectados y se detectó en una placa de acero molido limpio (Bruker Daltonics, Bremen, Alemania) en 40 repeticiones (para generar una base de datos MALDI-TOF MS de P. insidiosum) o cinco repeticiones (para evaluar la MALDI-TOF MS para la identificación de P. insidiosum), y se secaron al aire a temperatura ambiente antes de ser procesadas. Una vez que la solución de la matriz se secó al aire a temperatura ambiente, la muestra se analizó rápidamente, utilizando un espectrómetro de masas ultraflextreme Bruker. Las plantillas de ADN genómico (gADN) se extrajeron de los organismos y las analizaron usando una reacción en cadena de polimerasa multiplex basada en polimorfismo de nucleótido único (PCR).

El equipo informó que la MALDI-TOF MS identificó con exactitud las 13 cepas de P. insidiosum analizadas, hasta el nivel de especie. Los espectros de masas de P. insidiosum no coincidieron con ningún otro microorganismo, incluidos los hongos (es decir, especies de Aspergillus, especies de Fusarium y especies de hongos de la clase Zigomicetos), que tienen morfologías microscópicas similares con este oomiceto. Los métodos de biotipos basados en secuencias de MALDI-TOF MS y rADN pudieron clasificar correctamente a P. insidiosum en tres grupos: clado-I (cepas americanas), clado-II (cepas asiáticas y australianas) y clado-III (principalmente cepas tailandesas).

Los autores concluyeron que la MALDI-TOF MS se pudo utilizar con éxito para la identificación y el biotipo de P. insidiosum. La base de datos espectral de masas obtenida permite a los laboratorios de microbiología clínica, bien equipados con un espectrómetro de masas MALDI-TOF, identificar convenientemente a P. insidiosum, sin requerir reactivos específicos de patógenos (es decir, antígenos, anticuerpos o cebadores). El estudio fue publicado en la edición de diciembre de 2018 de la revista International Journal of Infectious Diseases.

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Universidad Mahidol
Bruker Daltonics